关键词:
去氢二异丁香酚
TFEB
自噬
甲型流感病毒(H1N1)
摘要:
基于转录因子EB(transcription factor EB,TFEB)/自噬溶酶体生物发生探究去氢二异丁香酚(dehydrodiisoeugenol, DEH)抗病毒感染的细胞学机制。采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测DEH对人非小细胞肺癌细胞系(A549)细胞活力的影响;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)检测其对甲型流感病毒(influenza A virus, H1N1)复制的影响;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测DEH对H1N1核蛋白(H1N1 nucleoprotein, H1N1-NP)表达的影响;免疫荧光检测DEH对H1N1-NP荧光强度的影响;构建H1N1滴鼻感染小鼠模型,评价30 mg·kg-1去氢二异丁香酚对H1N1感染的治疗作用;在胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts, MEFs)中通过转录组测序技术(RNA sequencing, RNA-seq)分析药物的转录表型组;利用微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)荧光质粒检测DEH对细胞自噬的影响;Western blot检测病毒感染下DEH对LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白自噬流的影响;最后,在野生型及TFEB敲除的永生化骨髓源性巨噬细胞(iBMDM)中评价TFEB表达缺失对DEH抗H1N1感染的影响。结果显示,DEH对A549细胞的半数抑制浓度(half-maximal inhibitory concentrations, IC50)为(87.17±0.247)μmol·L-1;体外以剂量依赖方式抑制H1N1复制;与H1N1滴鼻感染小鼠模型组相比,DEH治疗显著提升了小鼠的体质量和生存时间;药物处理后引起LC3聚集;在iBMDM中TFEB表达缺失显著限制了DEH抵抗H1N1复制的作用。综上所述,DEH通过激活TFEB/自噬溶酶体途径抵抗H1N1感染。