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关键词： 牛纽布病毒   VP1蛋白   病毒样颗粒   免疫原性   小鼠  

摘要： 针对牛纽布病毒(bovine nebovirus, BNeV) VP1基因进行密码子优化并构建重组质粒pFastBac-Dual-VP1,使用杆状病毒表达系统制备BNeV-VP1病毒样颗粒(virus-like particles, VLPs)。采用Western blot、间接免疫荧光和电镜对其进行鉴定。将验证正确的VLPs与MF59佐剂、CpG-ODG免疫增强剂混合后免疫小鼠并评估其免疫效果。结果显示，优化后的VP1基因密码子适应指数(codon adaptation index, CAI)为0.93,GC含量为60.4%;将构建的重组质粒转化至DH10Bac进行蓝白斑筛选，验证成功后转染至SF9细胞，获得重组杆状病毒Baculo-BNeV-VP1;电镜下可观察到直径在35～40 nm的BNeV VLPs; IFA和Western blot试验均证明VP1蛋白可以成功表达并具有生物学活性；通过蛋白优化发现感染剂量MOI=0.5时蛋白表达量最高；将50μg VLPs与MF59佐剂和CpG-ODN混合后，以肌肉注射方式免疫小鼠，结果显示VLPs免疫组在首免后7 d产生IgG抗体，且抗体滴度逐步增加，于28 d达到峰值(1∶102 400),35 d时有所下降，但仍保持较高水平；阻断效价BT50最高为640,可诱导小鼠产生BNeV VP1特异性阻断抗体。结果表明，利用杆状病毒表达系统表达了BNeV的VP1蛋白，并成功构建了BNeV VLPs,其能诱导小鼠机体产生体液免疫反应，为后续BNeV疫苗研究提供了参考。

关键词： 土地利用   生态系统服务价值   当量因子法   时空变化   玉曲河  

摘要： 玉曲河流域实施“两库七级”开发将对流域土地利用规划和生态环境保护产生较大影响，进行土地利用与生态系统服务功能的评价研究对流域土地资源优化配置和生态环境保护有着重要意义。本研究基于玉曲河流域2000—2022年3期的土地利用数据，通过动态度、转移矩阵和单位面积价值当量因子法，对流域土地利用和生态服务价值的时空变化进行分析。研究发现：1)玉曲河流域土地类型以草原和针叶林为主，2011—2022年土地利用流转频繁，其中草原的流入和流出面积占总体转移面积最多；2)年均ESV为1 415 123万元，ESV空间上西北高东南低，受土地荒漠化影响，下降趋势明显，下降率为0.87%,其中中等价值和高价值在2011—2022年间显著减少。

关键词： 猪肺炎   病毒   细菌   防治措施  

摘要： 猪肺炎是养猪业中常见且严重的疾病，严重影响猪只的健康和养殖经济。该疾病的发病原因复杂多样，包括病毒感染、细菌感染、环境因素及管理不善等。常见的病原体如猪繁殖与呼吸综合症病毒、猪流感病毒及细菌性病原体均可导致肺炎的发生。因此，了解猪肺炎的病因对采取有效的防治措施至关重要。本文旨在探讨猪肺炎的主要致病因素，并提出相应的防治策略，以期为养猪业提供科学依据，降低肺炎发病率，提高养殖效益。

关键词： 牛副流感病毒3型   基质蛋白(M)   血凝素-神经氨酸酶(HN)   病毒样颗粒   免疫原性  

摘要： 针对牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)的基质蛋白(M)和血凝素-神经氨酸酶(HN)基因进行密码子优化并构建重组穿梭质粒Dual-M+HN;使用杆状病毒表达系统制备BPIV3病毒样颗粒(virus-like particles, VLPs),并采用Western blot、间接免疫荧光和电镜对其进行验证；将验证成功的VLPs与MF59佐剂和CpG-ODN免疫增强剂混合通过肌注方式免疫小鼠。通过检测小鼠血清特异性抗体、中和抗体和血凝抑制抗体来评估BPIV3 VLPs的免疫效果。结果显示，优化后的M和HN蛋白基因密码子适应指数(codon adaptation index, CAI)分别为0.96和0.95,CG含量分别达到54.1%和53.1%;构建的重组质粒转化至DH10Bac进行蓝白斑筛选，将验证正确的重组杆粒转染至Sf9细胞，获得杆状病毒pFastBac-M+HN,电镜下观察可见直径约180 nm的BPIV3 VLPs; IFA和Western blot试验均证明目的蛋白的成功表达并具有生物学活性；通过蛋白优化发现感染剂量MOI=5时蛋白表达量最高；将50μg VLPs与MF59佐剂和CpG-ODN混合后肌注方式免疫小鼠，结果显示VLPs免疫组在首免2周时抗体开始上升，在二免后21 d时达到最高，平均IgG抗体滴度为1∶40 228,中和抗体滴度平均为1∶298,血凝抑制抗体滴度为1∶549,达到灭活苗水平(P≥0.05),表明本试验制备的VLPs能诱导机体产生体液免疫反应。结果表明，本试验成功制备了能自组装表达BPIV3 HN和M蛋白的VLPs,并能诱导小鼠机体产生体液免疫反应，为后续BPIV3 VLPs疫苗研究奠定了基础。

关键词： 自膨式主动脉瓣   主动脉瓣狭窄合并二叶式主动脉瓣   疗效分析   心功能  

摘要： 目的 探讨自膨式主动脉瓣对主动脉瓣狭窄（aortic stenosis, AS）合并二叶式主动脉瓣（bileaflet aortic valve, BAV）患者疗效以及心功能的影响。方法 选择2022年1月—2023年12月期间河南省胸科医院共招募100例AS合并BAV病患作为观察对象，使用随机数字表法将其分为对照组（外科主动脉瓣置换术，n=50）和观察组（经导管植入自膨式主动脉瓣膜治疗，n=50）,观察两组治疗效果，并对两组术前术后的心功能指标、血清炎性因子、氧化应激指标及主动脉相关指标进行比较，并记录术后并发症发生情况。结果 观察组术后1个月的左心室内径[（3.95±0.57）cm vs（4.36±0.48）cm]、室间隔厚度[（31.86±3.54）mmHg vs （35.26±3.71）mmHg]、肺动脉收缩压[（7.43±2.25）mm vs （9.17±2.54）mm]、e’值[（8.04±0.61）cm/s vs （9.83±0.75）cm/s]、血清单核细胞趋化蛋白1[（7.17±1.06）pg/L vs （9.51±1.38）pg/L]、五聚蛋白3[（1.09±0.23）pg/L vs （1.58±0.21）pg/L]和I细胞间黏附分子1水平[（212.53±38.41）pg/L vs （260.39±42.05）pg/L]、血清丙二醛[（6.25±1.14）μmol/L vs （8.41±1.03）μmol/L]水平均较对照组偏低（均P<0.05）;其临床疗效[96.00%vs 82.00%]、血清超氧化物歧化酶水平[（81.04±10.58）ku/L vs （75.21±10.07）ku/L]及主动脉瓣跨瓣峰值压差[（214.25±41.37）cm/s vs （75.21±10.07）ku/L]、主动脉瓣流速[（24.58±13.65）mmHg vs （15.64±9.58）mmHg]和主动脉瓣瓣口面积[（1.56±0.84）mm2vs （4.24±1.17）mm2]均高于对照组（P均<0.05）。两组术后并发症发生率无明显差异（P>0.05）。结论 采用自膨式主动脉瓣可有效提高AS合并BAV病患的临床疗效，改善其心功能和主动脉相关指标，减轻氧化应激和炎症反应，安全性较高。

关键词： 寨卡病毒   药物重定位   小分子抗病毒药物   病毒靶点   宿主靶点  

摘要： 寨卡病毒（ZIKV）是一种蚊媒传播的黄病毒，与成人神经炎症性格林巴利综合征和新生儿小头畸形等神经系统并发症有关。由于目前尚无特异性治疗ZIKV感染的药物或预防性疫苗上市，因此，迫切需要采取综合措施防治ZIKV感染并阻止其传播。该文综述了ZIKV基因和蛋白的结构与功能，针对开发小分子抗病毒药物这一热点，总结了通过高通量筛选以及药物重定位方法开发靶向病毒的抗ZIKV候选药物的进展，归纳了靶向病毒和宿主细胞的候选药物的作用机制，并展望了未来小分子抗病毒药物的研发趋势，旨在为促进新的抗ZIKV药物研发提供参考。

关键词： 卵巢癌细胞   高血糖   铁蓄积   CCM3   NRF2-GPX4  

摘要： 目的 探讨高糖环境下上皮性卵巢癌细胞A2780的生存状态与作用机制，并初步探究与CCM3的关系。方法 在健康大鼠体内进行裸鼠成瘤实验检测肿瘤生长情况。体外培养上皮性卵巢癌细胞A2780,将其分为3组：对照组、高糖组(HG组)、ML385组。采用试剂盒检测细胞凋亡(AM/PI)水平、亚铁离子水平和线粒体膜电位(JC-10)活性；采用平板克隆、划痕与Transwell实验检测各组细胞增殖与迁移能力；WB法检测各组GPX4、COX2、CCM3蛋白表达水平。结果 体外试验中，高糖组卵巢癌细胞随葡萄糖浓度升高，增殖和迁移受到不同程度的抑制。高糖条件下卵巢癌细胞出现线粒体膜电位异常和明显的铁蓄积，铁蓄积关键调控因子GPX4表达下调，COX2表达升高，凋亡相关蛋白CCM3表达降低。除CCM3的表达水平外，ML385组的结果与高糖组相似。在体内实验中，葡萄糖给药组的裸鼠肿瘤体积未出现明显变化，但新生血管密度增加，肿瘤细胞排列紧密。ML385处理组的裸鼠肿瘤组织明显缩小，新生血管密度减小，肿瘤细胞排列疏松，坏死灶增加。结论 高糖环境引发上皮性卵巢癌细胞A2780铁蓄积从而影响细胞迁移、增殖与凋亡，CCM3可能在其中起到一定的调控作用。

关键词： A群轮状病毒   参考品   抗原检测试剂盒   胶体金   稳定性  

摘要： 目的 制备一套A群轮状病毒（group A rotavirus,RVA）抗原检测试剂盒（胶体金法）质量控制参考品，并对其稳定性进行考察。方法 用细胞培养法制备的1组肠道病毒液、轮状病毒（rotavirus,RV）液及致腹泻的主要细菌培养物，建立RVA抗原检测试剂企业用参考品。阳性参考品（P1～P8）、阴性参考品（N1～N8）、检测限参考品S0、精密性参考品R0。随机抽取3套参考品（P1～P8、R0、S0），使用BioRad ChemiDoc MP系统将试剂盒条带亮度信号转化为灰度值，结果结合检测线（T线）灰度值的变异系数（coefficient of variation,CV）以及肉眼观察条带是否阳性且显色均一，考察分装均匀性；将参考品分别放置于4℃、25℃、37℃保存3、7 d及反复冻融2～6次，测定灰度值，利用Mann-Whitney U检验考察参考品的稳定性。结果 阳性参考品、检测限参考品、精密性参考品显色条带均一，无肉眼可见的差异，灰度值CV在4%以内，参考品分装均匀性良好；冻融2～6次检测显色条带均一、无肉眼可见的差异，经灰度值检测及统计分析，差异无统计学意义（P>0.05）；参考品在4℃、25℃及37℃放置7 d内，均具有较好的稳定性，差异无统计学意义（P>0.05）。结论 本研究建立了RVA抗原检测试剂盒（胶体金法）企业用参考品，均一性、稳定性好，可用于RVA抗原检测试剂盒的质量控制。

关键词： 结核病   艾滋病   MTB/HIV双重感染  

摘要： 目的 回顾性分析陕西省结核分枝杆菌/人类免疫缺陷病毒（Mycobacterium tuberculosis/human immunodeficiency virus, MTB/HIV）双重感染患者筛查及流行趋势情况，为进一步完善双重感染防控策略提供科学依据。方法 通过《中国结核病信息管理系统》和《MTB/HIV双重感染防治管理工作年度报表》收集并分析2018—2022年陕西省MTB/HIV双重感染患者筛查、治疗、转归情况。结果 2018—2022年，累计接受HIV抗体检测的结核病患者49 252例，检测率55.41%,HIV检测阳性数57例；同期，新检出的HIV感染/AIDS症状筛查率95.91%，结核病检查率94.25%，诊断MTB/HIV感染患者174例；既往的HIV感染/AIDS症状筛查率96.94%，结核病检查率95.45%，诊断MTB/HIV感染患者135例；2018—2022年结核病患者中检测HIV(χ趋势2=4 589.301, P<0.05)、新检出和既往HIV中结核的筛查(χ趋势2=47.400, P<0.05；χ趋势2=60.196, P<0.05)、新检出和既往HIV中结核的检查(χ趋势2=755.856, P<0.05；χ趋势2=526.498, P<0.05)总体呈逐年波动上升趋势；各年新检出和既往HIV中的筛查率、检查率、检出率除2020和2022年检查率差异无统计学意义外，其余差异均存在统计学意义（P<0.05）；累计发现的MTB/HIV感染患者中男性336例（91.80%），女性30例（8.20%）；累计诊断MTB/HIV感染患者抗结核治疗率89.62%，结核成功治疗率87.80%。结论 陕西省双向筛查和防治工作质量在逐步提高，新检出HIV感染/AIDS患者中结核病患者的检出率较高，加强新检出HIV感染/AIDS患者中结核病的筛查工作有利于提高MTB/HIV感染的早期发现及早治疗，提高MTB/HIV双重感染患者结核病的治疗成功率、降低死亡率，有效地控制我省MTB/HIV双重感染疫情。

关键词： 虫草菌丝   心脏衰老和损伤   网络药理学   氧化应激   细胞凋亡   Nrf2/HO-1/NF-κB通路  

摘要： 借助动物实验和网络药理学,探究虫草菌丝(Cordyceps sinensis,CS)在体内改善小鼠心脏衰老和损伤的作用及机制。实验研究采用D-半乳糖(D-galactose,D-gal)连续皮下注射建立心脏衰老小鼠模型,30只小鼠随机分成正常组、模型组、CS低剂量(CS-low,CS-L)组、CS高剂量(CS-high,CS-H)组和维生素E(vitamin E,VE)组,在实验期间,每天经灌胃分别给予生理盐水、不同剂量CS混悬液或VE混悬液。在D-gal和不同药物联合干预60 d后,处死全部小鼠,收集血液及心脏组织,进而针对小鼠心脏衰老和损伤相关的各项指标进行检测和观察。实验结果显示,高、低剂量的CS和VE都能不同程度地改善模型小鼠衰老表型、心脏指数、心肌酶谱、细胞周期阻滞蛋白和衰老相关分泌表型(senescence-associated secretory phenotypes,SASP)蛋白表达水平、心脏组织纤维化水平和心脏组织病理学特征。进一步开展网络药理学分析,采用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP),获取CS活性成分259个,根据Gene Cards、OMIM数据库获取心脏衰老相关靶点2 568个,得出CS与心脏衰老交集靶点133个。通过靶点进行基因本体论(Gene Ontology,GO)功能和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)进一步分析,发现与心脏衰老相关的通路涉及氧化应激、凋亡、炎症相关信号通路等。故进一步实验验证发现,高、低剂量的CS和VE都能不同程度地改善模型小鼠心脏组织氧化应激和细胞凋亡程度。此外,CS-H和VE能激活模型鼠核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)/血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)通路和抑制核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)通路关键信号分子蛋白表达水平。总之,该研究基于网络药理学分析和实验证实,CS可能通过调控Nrf2/HO-1/NF-κB通路活性,减轻衰老小鼠心脏氧化应激、细胞凋亡和炎症反应水平,进而减轻心脏衰老和损伤。