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关键词： 猪圆环病毒4型   ORF2   Cap基因   序列分析  

摘要： 猪圆环病毒4型(Porcine circovirus type-4,PCV4)是一种最近几年发现的圆环病毒,在中国、韩国、泰国和欧洲流行,但其致病性尚不明确。PCV4具有编码PCV主要蛋白Cap的开放阅读框ORF2等典型特征。本研究从采自贵州省疑似PMWS的病料中,应用PCR方法进行了PCV4 Cap基因组扩增和测序,同时运用生物信息学软件进行了分析。结果表明,所获得的PCV4 Cap核苷酸序列全长为687 bp,起始密码子和终止密码子分别为TTA和CAT;核苷酸的同源性与参考毒株均在96.2%～99.1%,所编码的氨基酸的相似性为89.5%～96.1%;ORF2编码的氨基酸易变异位点共23个,且变异位点主要集中于115位之后;本试验所收集的19株PCV4 Cap基因系统进化树未体现出空间和时间上的规律,表明PCV4在全世界的分布无地域性。

关键词： 白纹伊蚊   rAlb-34kDa-1蛋白   2型登革病毒   免疫调控  

摘要： 目的 探讨白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34kDa-1对巨噬细胞（Raw264.7）的免疫调控作用及对Raw264.7细胞中2型登革病毒（Dengue virus type 2,DENV-2）复制的影响。方法 将原核表达质粒pET32a(+)-rAlb-34kDa-1转入大肠埃希菌（***）BL21(DE3)后，按实验室前期建立的表达纯化条件获取唾液蛋白并通过SDS-PAGE及Western Blot(WB)方法鉴定；以CCK8法分析rAlb-34kDa-1蛋白对Raw264.7细胞的毒性。将0.02、0.20和2.0μg/mL浓度rAlb-34kDa-1作用Raw264.7细胞6、12和24 h，采用实时荧光定量逆转录PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR, qRTPCR)检测细胞中白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、趋化因子配体2(chemokine ligand 2, CCL2)、干扰素-β(interferon-β, IFN-β)、干扰素刺激基因15(interferon stimulated gene 15, ISG15)的表达，运用酶联免疫吸附实验（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）检测细胞培养上清IL-6和TNF-α的分泌；免疫荧光法观察rAlb-34kDa-1作用Raw264.7细胞后p65进入细胞核的情况，分析rAlb-34kDa-1蛋白是否通过NF-κB信号通路实现对Raw264.7细胞的免疫调控；按分组（DENV-2作用组、唾液蛋白+DENV-2共孵育组）加不同的处理因素作用6、12和24 h后收集细胞，利用qRT-PCR检测细胞内DENV-2的mRNA表达量及运用流式细胞术（FCM）检测不同处理因素作用24 h细胞内J2(dsRNA)的荧光强度。结果 SDS-PAGE及WB结果显示成功获得rAlb-34kDa-1蛋白且经CCK8法分析该蛋白对Raw264.7细胞无毒性；0.2μg/mL和2.0μg/mL的rAlb-34kDa-1均能诱导Raw264.7细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α、CCL2、IFN-β、ISG15的表达；rAlb-34kDa-1作用Raw264.7细胞1 h后显著增强Raw264.7细胞核内的p65的荧光强度；rAlb-34kDa-1与DENV-2作用于Raw264.7细胞12 h时，2μg/mL的rAlb-34kDa-1显著增强细胞中DENV-2的mRNA表达量。作用24 h时，0.02、0.20和2μg/mL的rAlb-34kDa-1均能增强Raw264.7细胞中DENV-2的mRNA表达量，2μg/mL的rAlb-34kDa-1与DENV-2共孵育于Raw264.7细胞24h后细胞内J2的荧光信号显著增强。结论 rAlb-34kDa-1蛋白能调节小鼠Raw264.7细胞免疫应答，促进DENV-2在Raw264.7细胞中复制。

关键词： 疫苗   病毒载体   免疫原性   安全性  

摘要： 疫苗是人类应对感染性疾病最重要的武器之一。随着技术的进步，多种能增进疫苗免疫原性和安全性的新型疫苗被开发。病毒载体作为生物学研究中一个重要的基因操作工具，是一个搭载疫苗的良好平台。它通过模拟病毒结构和生理特征，不仅能激发细胞和体液免疫，也能激发机体的先天免疫和黏膜免疫，提升疫苗的免疫原性。同时基因工程的改造进一步提高了它的安全性。本文阐述了现在用于疫苗开发的主要病毒载体的类型和特点，并对以它们为平台设计开发的疫苗进行了综述，旨在为病毒载体疫苗的发展提供参考和启示。

关键词： 甲型流感病毒   肺炎支原体   儿童   T淋巴细胞亚群   炎性细胞因子   自然杀伤细胞  

摘要： 目的 观察甲型流感病毒（IAV）合并肺炎支原体（MP）感染患儿外周血淋巴细胞亚群、炎性细胞因子水平变化，探讨其与肺炎严重程度的相关性。方法 2023年3月—2024年5月河南省儿童医院诊治IAV合并MP感染患儿240例，未发生肺炎者120例为无肺炎组，发生肺炎者120例参照临床肺部感染评分分为重症感染组33例和轻度感染组87例。比较3组入院次日外周血CD3+T淋巴细胞百分比、CD4+/CD8+比值、CD19+B淋巴细胞百分比、自然杀伤（NK）细胞百分比及血清白细胞介素（IL）-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17a、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、干扰素（IFN）-α、IFN-γ水平；采用Spearman相关法分析CD3+T淋巴细胞百分比、CD4+/CD8+比值及IL-6、IL-10、IL-4、IFN-γ与肺炎严重程度的相关性。结果 （1）3组CD3+T淋巴细胞百分比、CD4+/CD8+比值及CD19+B淋巴细胞百分比比较差异均有统计学意义（H=6.574～71.531,P均<0.05）,NK细胞百分比比较差异无统计学意义（H=1.749,P=0.417）。重症感染组CD3+T淋巴细胞百分比[50.62%（47.17%,55.31%）、CD4+/CD8+比值[0.83（0.63,1.75）]均低于轻度感染组[54.17%（50.65%,61.44%）、1.36（0.82,1.69）]和无肺炎组[67.17%（62.35%,73.35%）、1.38（1.09,1.73）]（P<0.05）,轻度感染组均低于无肺炎组（P<0.05）;无肺炎组CD19+B淋巴细胞百分比[（23.24±6.49）%]低于轻度感染组[（25.32±7.65）%]和重症感染组[（28.77±7.54）%]（P<0.05）,轻度感染组与重症感染组比较差异无统计学意义（P>0.05）。（2）3组血清IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ水平比较差异均有统计学意义（H=6.574～69.080,P均<0.05）,IL-5、IL-8、TNF-α、IFN-α、IL-17a水平比较差异均无统计学意义（H=2.626～6.832,P均>0.05）。重症感染组血清IL-4[3.46（2.37,4.31）ng/L]、IL-6[37.4（30.89,64.23）ng/L]、IL-10[32.44（19.69,52.86）ng/L]、IFN-γ[2.72（1.18,4.04）ng/L]水平均高于轻度感染组[2.65（1.57,4.15）、19.57（5.19,37.78）、24.07（8.99,40.62）、2.50（1.53,4.22）ng/L]和无肺炎组[2.18（1.10,3.26）、7.24（4.50,10.00）、9.72（5.75,15.63）、1.96（1.11,3.03）ng/L]（P<0.05）,轻度感染组均高于无肺炎组（P<0.05）。（3）CD3+T淋巴细胞百分比（r=-0.554,P<0.001）、CD4+/CD8+比值（r=-0.632,P=0.001）与肺炎严重程度呈负相关，IL-6（r=0.532,P<0.001）、IL-10（r=0.525,P<0.001）、IL-4（r=0.569,P=0.001）、IFN-γ（r=0.564,P=0.015）与肺炎严重程度呈正相关。结论 CD3+T淋巴细胞百分比及CD4+/CD8+比值降低，IL-6、IL-10、IL-4、IFN-γ升高的IAV合并MP感染患儿易发生肺炎，且上述指标表达与肺炎严重程度相关。

关键词： 黑水虻幼虫粉   四川白鹅   免疫功能   肠道形态   肠道菌群  

摘要： 旨在探究黑水虻幼虫粉(Hermetia illucens larvae meal, HILM)替代饲料蛋白对四川白鹅免疫功能、肠道形态和微生物菌群结构的影响。64只健康状况良好的1日龄四川白鹅随机分为4组，每组4个重复，每个重复4只鹅，即对照组、2%HILM组、4%HILM组和8%HILM组，分别饲喂含0%、2%、4%、8%HILM的等能等氮饲粮，试验期40 d。结果显示，与对照组相比，8%HILM提高了血清IgG1、IgG2a和补体C3水平，统计学比较差异极显著(P<0.01);4%HILM显著提高了脾脏CD4表达水平(P<0.05),8%HILM显著提高了脾脏IL-10表达水平(P<0.05);4%HILM组空肠和回肠绒毛长度/隐窝深度值(VH/CD)显著上升(P<0.05);各HILM替代组空肠SIgA水平均显著上升(P<0.05);4%HILM极显著提高拟杆菌属(Bacteroides)丰度(P<0.01),各HILM替代组嗜胆菌属(Bilophila)和沃氏嗜胆菌(Bilophila wadsworthia)丰度均显著降低(P<0.05)。结果表明，HILM能增强四川白鹅的免疫功能，改善四川白鹅空肠和回肠肠道形态，增强空肠局部黏膜免疫功能，提高盲肠有益菌属丰度以及降低有害菌属丰度，保护肠道健康。

关键词： 甲型流感病毒   核酸检测   样本选择   咽拭子   血液  

摘要： 目的 :探究咽拭子和血液样本在小儿甲型流感病毒感染情况筛查中的应用价值。方法 :收集141例疑似甲型流感感染患儿为研究对象，均获取患儿咽拭子样本和血液样本做流感病毒核酸检测，对初次检测判定为可疑者实施二次采样检测，判定最终筛查结果。统计对比两种样本检测结果。结果 :咽拭子样本中甲型流感病毒核酸检测的Ct值和甲型流感病毒的阳性检出率明显高于血液样本，可疑感染检出率明显低于血液样本（P <0.05）；但两种样本甲型流感病毒的阴性检出率比较差异无统计学意义（P> 0.05）。血液样本中甲型流感病毒检出情况与咽拭子检出情况一致性一般（Kappa=0.688,P <0.05）。结论 :小儿甲型流感病毒感染筛查中咽拭子样本检出效率明显优于血液样本。

关键词： 新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)   分离鉴定   S1基因   遗传进化  

摘要： 对广西某鸭场临床疑似由新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus, NDRV)感染的雏鸭进行RT-PCR鉴定、NDRV分离、毒株细胞培养特性、雏鸭致病性、S1基因序列测定和遗传进化分析等研究。结果显示，RT-PCR检测组织病料为NDRV阳性，组织样品处理后接种SPF鸭胚，鸭胚出现发育迟缓、死亡，胚体全身及多脏器出血等症状；用鸭胚尿囊液接种雏鸭后出现脾脏坏死的特异性病变。S1基因的同源性与进化树分析结果显示，GX2022株与公布的部分NDRV毒株核苷酸序列相似性为93.7%～98.9%,而与鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus, MDRV)GX2010株、GX110058株、S1133株，与禽呼肠孤病毒(Avian reovirus, ARV)815株、ZJM2000M株同源性很低，在21.8%～28.4%之间。进化树分析显示，该毒株与我国流行的NDRV处在同一个分支上，与MDRV和ARV的距离较远，说明分离到的毒株是新型鸭呼肠孤病毒。毒株接种LMH、CEF、Vero细胞后均产生空泡和细胞崩解等细胞病变。该新型鸭呼肠孤病毒临床感染的致病特征研究，有助于新型鸭呼肠病毒病的防控及疫苗的研发。

关键词： 坏死性凋亡   病毒   病毒性感染   分子机制   抑制剂  

摘要： 程序性细胞死亡在机体的生长发育及组织器官的稳态中发挥着重要作用。坏死性凋亡作为一种新型的程序性细胞死亡模式，具有坏死的形态学特征，能够导致细胞崩裂并释放大量损伤相关分子模式，在多种疾病的发生和发展中起着重要作用。病毒性感染疾病严重危害人类和家畜的健康，已有研究证实在病毒性感染中存在坏死性凋亡的细胞死亡途径。本文通过综述坏死性凋亡在病毒性感染中的研究现状，阐明病毒感染与坏死性凋亡之间的相互调控分子机制，以及坏死性凋亡抑制剂的应用进展，旨在为病毒性感染的防治提供新的思路。

关键词： 新对叶百部碱   胰腺癌   凋亡   增殖   迁移  

摘要： 目的 探究新对叶百部碱（NTS）对人胰腺癌细胞MiaPaCa-2和PANC-1凋亡的影响及作用机制。方法 以0（对照组）、20、40、60、80、100μg·mL-1的NTS分别处理MiaPaCa-2、PANC-1细胞24、48、72 h后，采用MTT法检测细胞存活率；分别设置对照组(0μg·mL-1)和NTS低、中、高质量浓度(20、40、60μg·mL-1)组，采用平板克隆法检测NTS对MiaPaCa-2、PANC-1细胞的增殖能力的影响；采用划痕愈合实验检测细胞迁移能力；采用Hoechst 33258染色法观察细胞的凋亡；采用流式细胞术检测细胞的凋亡率、线粒体膜电位；采用Western blotting法检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、活化半胱氨酸蛋白酶-3（cleaved-Caspase-3）、半胱天冬酶-9（Caspase-9）相关蛋白表达水平。结果 与对照组比较，不同质量浓度NTS可显著降低MiaPaCa-2、PANC-1细胞存活率（P<0.01）、克隆形成率（P<0.05、0.01）、划痕愈合率（P<0.05、0.01）、线体膜电位（P<0.01）；显著增加MiaPaCa-2和PANC-1细胞凋亡水平（P<0.01）；在蛋白水平上，NTS显著上调促凋亡相关因子cleaved-Caspase-3、Bax、Caspase-9蛋白的表达水平，下调抑制凋亡因子Bcl-2蛋白表达水平（P<0.05、0.01）。结论 NTS可有效抑制人胰腺癌MiaPaCa-2、PANC-1细胞增殖和迁移能力，并促进其凋亡，其机制可能与下调抑制凋亡蛋白Bcl-2并上调促凋亡蛋白Bax、cleaved-Caspase-3、Caspase-9表达有关。

关键词： 转基因鸡   慢病毒载体   显微注射   绿色荧光蛋白  

摘要： 由于禽类独特的生殖生理特点和胚胎发育的复杂性，笔者利用慢病毒载体与鸡胚血管显微注射法相结合，以期探寻出一种简便、有效的制备转基因鸡的方法。对发育至第14～15期鸡胚，于卵黄外周静脉血管显微注射1μL病毒滴度为1×109TU/m L携带由人源性泛素启动子C调控的eGFP慢病毒，试验共操作了76枚胚胎，出雏44只，孵化率为57.9%(44/76)。结果显示，经检测，在G0代雏鸡的喙部、眼部、羽毛、大脑、胸肌、肺、腺胃、肠、脾、肝、心脏、肾中均观测到绿色荧光蛋白广泛性表达；在随机抽检G0代7只小鸡的性腺中，均观测到绿色荧光蛋白超强表达100%(7/7)；对发育到性成熟期的母鸡和公鸡随机抽样解剖，观测到睾丸和卵巢的卵泡中绿色荧光蛋白广泛性表达；对G1代60只雏鸡经PCR检测发现14只为阳性，阳性率为23.3%(14/60),Southern-blot检测结果进一步证实为阳性。结果表明，利用该方法成功生产出转基因鸡，为家禽基因组编辑创立了一种方便快捷、高效稳定的新方法。