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摘要： 据中国疾病预防控制中心网站2025年1月9日消息，近日，我国发现一起猴痘病毒Ib亚分支聚集性疫情，传染源为1位外籍人员，有刚果（金）旅居史。发现疫情后，国家及浙江、广东、北京、天津等省（市）迅速启动联防联控机制，开展流调溯源、风险排查、病例诊治等工作，在密切接触者中陆续发现4例关联病例，均为亲密接触后感染。相关病例以皮疹、疱疹等症状为主，症状较轻。目前在一般接触人员中未发现感染者，相关感染者和风险人员正在接受医学治疗和健康观察，疫情已得到有效处置。

关键词： 柯萨奇病毒A10型   转染   病毒拯救  

摘要： 目的 比较3种柯萨奇病毒（Coxsackievirus,CV）-A10拯救策略，以期为选择合适的病毒拯救策略开展肠道病毒相关毒株的研究奠定基础。方法 将CV-A10毒株基因组克隆至pBR322载体，基因组5′端引入T7启动子序列，3′端引入polyA尾及NotⅠ酶切位点，构建pBR322-CV-A10质粒。在polyA尾后进一步引入丁型肝炎病毒核酶切割序列（hepatitis delta virus ribozyme,HdvRZ），构建pBR322-CV-A10-HdvRZ质粒。3种病毒拯救策略分别为：以病毒基因组全长RNA转染Vero细胞；以线性化的病毒基因组cDNA与T7 RNA聚合酶表达质粒pCAGGS-T7共转染Vero细胞；以pBR322-CV-A10-HdvRZ质粒与pCAGGS-T7质粒共转染Vero细胞。3种策略获得的拯救病毒在Vero细胞上扩增至第3代后，RT-PCR分别扩增1 500 bp左右的基因片段，并测序；Western blot法检测病毒结构蛋白VP1的表达；将拯救病毒接种于Vero细胞，分析病毒的生长动力学特性。结果 3种策略均可获得拯救病毒，各拯救病毒在Vero细胞上的生长特性一致，基因组序列与亲本毒株一致。3种策略均可实现细胞中病毒结构蛋白VP1的表达。3种策略拯救得到的CV-A10在Vero细胞上具有一致的增殖特性。结论 3种策略均可成功拯救得到CV-A10。以病毒基因组全长RNA转染Vero细胞准备步骤复杂，转染后出毒时间短，适用于特定毒株的快速拯救；以双质粒共转染Vero细胞操作最简便，但转染后出毒所需时间较长，适用于基础研究中一系列重组病毒的拯救。上述策略为CV-A10的拯救提供了灵活且高效的途径。

关键词： 单细胞   质谱分析   超声   窄内径毛细管   代谢物分析  

摘要： 单细胞代谢物分析能够在小分子水平上揭示细胞间异质性及其分子多样性，尤其是活单细胞代谢物分析能够展示保真度更高的生化信息。本研究建立了基于超声可连续进样的完整单细胞代谢组学质谱分析平台，旨在提升单细胞利用率和质谱检测效率。此平台基于微型化超声模块产生的机械运动实现了长达60 min的细胞悬浮和分散，并且对细胞的完整性和活性影响较小，细胞存活率高于70%。通过比较静置组和超声组的细胞悬浮液密度和质谱检出的单细胞数量，发现超声处理显著降低了细胞沉降速度，提高了单细胞质谱检出单细胞的数量。将此分析平台用于小鼠小脑星形胶质细胞（C8D1A）和小鼠胶质瘤细胞（GL261）的单细胞分析，实现了不同种类细胞的聚类及差异化分析，显示了本方法在细胞异质性分析以及细胞识别中的应用潜力，为单细胞分析提供了新思路及解决方案。

关键词： 炎症小体   信号通路   和营通气片   寒邪   腰椎间盘突出症   细胞凋亡  

摘要： 目的:探讨和营通气片对大鼠腰椎间盘突出症(LDH)寒凝证的影响，基于NLRP3/NF-κB炎症小体信号通路探讨其可能的作用机制。方法:将30只SD雄性大鼠进行腰椎间盘突出症造模，然后随机挑选24只进行寒冷刺激，随后分成对照组(LDH大鼠模型)、模型组(LDH寒凝证大鼠模型)、和营通气片低剂量组、和营通气片高剂量组及吲哚美辛组，每组6只，干预28 d。用神经功能评分评价寒邪对腰椎间盘突出症的影响，用ELISA法检测IL-1β和TNF-α的含量，用Western Blot法和实时PCR检测NLRP3、NF-κB、ASC、IL-1β、TNF-α蛋白和mRNA的表达水平，用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:寒邪促进腰椎间盘突出症的发展，与对照组比较，模型组髓核组织PLA2活性升高，痛阈降低，神经根组织中NLRP3、NF-κB、ASC、IL-1β、TNF-α蛋白和mRNA表达水平均提高，细胞凋亡增加(P<0.05);与模型组比较，吲哚美辛组及和营通气片组大鼠神经根组织中髓核组织PLA2活性降低，痛阈升高，NLRP3、NF-κB、ASC、IL-1β、TNF-α蛋白和mRNA表达水平均降低，细胞凋亡减少(P<0.05)。结论:和营通气片可能通过抑制NLRP3/NF-κB相关表达，缓解腰椎间盘突出症寒凝证大鼠髓核炎症及细胞凋亡，提高大鼠痛阈，NLRP3/NF-κB信号调控通路是和营通气片对大鼠腰椎间盘突出症寒凝证的可能作用机制。

关键词： 大黄蛰虫丸   心脏衰老   网络药理学   分子对接   凋亡   PI3K/AKT/HIF-1α信号通路  

摘要： 研究大黄蛰虫丸(DHZCP)延缓心脏衰老(HA)的作用，并探讨其潜在的作用机制。采用网络药理学和分子对接，探究DHZCP延缓HA的靶点和潜在作用机制，并采用DHZCP含药血清对D-半乳糖(D-gal)诱导的衰老心肌细胞关键靶点和通路进行体外实验验证。通过TCSMP数据库筛选DHZCP的活性成分，并预测起作用的相关靶点；通过GeneCards数据库、OMIM数据库和DisGeNET数据库筛选整合HA相关靶点；将DHZCP活性成分靶点与HA靶点取交集后，通过STRING 12.0数据库构建蛋白-蛋白相互作用网络，并运用Cytoscape 3.9.1软件基于degree筛选核心靶点；通过Metaspace平台对核心靶点进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析以预测作用机制；并通过AutoDock Vina平台进行分子对接验证。结果显示，共筛选DHZCP活性成分靶点774个，HA相关靶点4 520个，取交集后共得到交集靶点510个，其中核心靶点有B细胞淋巴瘤2基因(BCL-2)、丝氨酸/苏氨酸激酶1(AKT1)和缺氧诱导因子1亚基A(HIF1A)等。GO和KEGG富集分析提示DHZCP主要通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/AKT信号通路、HIF-1α信号通路、长寿信号通路和凋亡等发挥作用。结合GO和KEGG通路富集分析，选择PI3K/AKT/HIF-1α信号通路进行验证。CCK-8检测显示，D-gal能显著抑制H9c2细胞增殖，DHZCP含药血清能增加H9c2细胞活性；SA-β-gal染色检测显示，D-gal组蓝绿色阳性细胞数量显著增加，DHZCP含药血清可以减少蓝绿色阳性细胞数量；TUNEL染色检测显示，DHZCP含药血清可以减少凋亡细胞的数量；经DHZCP含药血清处理后，Klotho、BCL-2、p-PI3K/PI3K、p-AKT1/AKT1和HIF-1α蛋白表达上调，P21、P16、BCL-2相关X蛋白(Bax)和cleaved caspase-3蛋白表达受抑制。结果表明，DHZCP是通过多成分、多靶点和多途径发挥延缓HA的作用，其机制可能是通过激活PI3K/AKT/HIF-1α信号通路减少细胞凋亡而实现的。

关键词： 坦布苏病毒(TMUV)   分支3   分离鉴定   鹅   致病性  

摘要： 【目的】明确Cluster 3鹅源坦布苏病毒(Tembusu virus, TMUV)基因组变异情况及其对鹅的致病性，为Cluster 3 TMUV的防控提供参考。【方法】利用BHK-21细胞对感染TMUV的鹅肝脏组织样品进行病毒分离，通过RT-PCR、间接免疫荧光试验(IFA)、透射电镜观察进行鉴定，并测定分离株的生长曲线。对分离株完成全基因组扩增后，使用ModelFinder、MrBayes等软件对其进行遗传进化分析，并对分离株的E蛋白进行氨基酸突变位点分析；测定分离株病毒滴度后，攻毒30日龄鹅，观察鹅各组织器官临床剖检病变及组织病理变化，使用实时荧光定量PCR检测鹅各组织脏器中的病毒载量。【结果】RT-PCR成功鉴定得到2份TMUV核酸阳性病料，接种至BHK-21细胞后，60 h即可观察到明显病变。将3代病毒液IFA检测可观察到明显红色荧光，透射电镜可观察到直径约50 nm、有囊膜的病毒粒子。从发病鹅肝脏组织成功分离得到2株TMUV,分别命名为JM3与JM1205。病毒一步生长曲线结果显示，JM3和JM1205株分别在培养60和48 h时病毒滴度最高。全基因扩增结果显示，JM3和JM1205株基因组全长均为10 994 bp。遗传进化树显示，JM3和JM1205株均为Cluster 3 TMUV成员，与Cluster 3 TMUV鸡源分离株CTLN遗传距离最近。氨基酸突变位点分析结果显示，与GenBank中最早上传的TMUV毒株MM1775株相比，JM3和JM1205株的E蛋白存在多个氨基酸位点突变，其中V157A突变可能与TMUV毒力增强相关。攻毒后1 d后鹅开始出现排绿色稀粪症状，攻毒后7 d开始出现神经症状。JM3组在攻毒后14 d仍持续排毒，JM1205组排毒持续至攻毒后11 d。攻毒后6 d,鹅出现体重增长减缓、下降的情况，至10 d开始恢复缓慢上升。剖检发现攻毒组鹅出现不同程度的脾脏肿大、胰脏坏死、肝脏发白、大脑充血；此外JM3株攻毒组鹅出现卵巢出血、心包积液；JM1205株攻毒组鹅出现心脏出血。攻毒后各时间点脾脏病毒载量均最高，在攻毒后3 d达到峰值，随后逐渐下降。【结论】本研究自广东地区养鹅场分离得到2株Cluster 3 TMUV:JM3和JM1205,2株分离株均对鹅有致病性，可在鹅体内多个器官复制，引起鹅共济失调、体重下降等症状。

关键词： 牛副流感病毒3型(BPIV3)   HN蛋白   间接ELISA   原核表达  

摘要： 为建立牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)血清学检测方法，本试验对BPIV3的HN、NP、F、P蛋白进行原核表达、纯化，筛选最适蛋白包被抗原，建立间接ELISA检测方法。结果显示，成功表达了BPIV3的4种重组蛋白rHN、rNP、rF和rP;棋盘滴定结果显示，rHN蛋白作为包被蛋白具有最高的P/N值，因此用于后续方法建立。摸索间接ELISA的最适反应条件：抗原包被质量浓度为0.5 mg/L,37℃1.5 h; 5%脱脂牛奶，4℃过夜封闭；血清1∶50稀释，37℃孵育1 h;二抗稀释度为1∶10 000,37℃孵育0.5 h;底物反应条件为37℃12 min。特异性试验结果显示，所建立的方法能够特异性识别BPIV3抗体阳性血清，且灵敏度达到1∶800,批内与批间重复性的检测中变异系数均小于10%,与SVANOVIR试剂盒检测同一批样品的总符合率为92.22%。应用该方法对河北地区192份血清样品进行检测，血清中BPIV3抗体阳性率为66.15%。结果表明，本试验构建的BPIV3抗体间接ELISA检测方法适用于临床大规模血清学调查。

关键词： 秸秆还田   生物质炭   旱地红壤   高通量测序   微生物组成  

摘要： 为明确有机物料不同还田方式对土壤微生物群落特征的影响，依托2年的旱地红壤改良田间试验，利用定量PCR和高通量测序技术分析了玉米秸秆、羊粪单施以及与生物质炭配施下土壤微生物群落丰度和结构的变化。结果表明：（1）与对照（不施任何物料）相比，单施羊粪显著提高了土壤养分含量和pH，而单施秸秆对土壤pH和养分无显著影响。与单施秸秆和羊粪相比，生物质炭配施秸秆和羊粪处理土壤有机碳含量分别显著提高了133.5%、81.47%。（2）单施羊粪处理细菌和真菌丰度分别显著提高了448.7%、1 709%，且与生物质炭配施处理细菌丰度进一步提高了35.34%；而单施秸秆仅提高了真菌丰度。单施秸秆及其与生物质炭配施显著降低了细菌多样性和丰富度，而对真菌多样性无显著影响。（3）秸秆、羊粪单施及与生物质炭配施均显著改变了细菌和真菌群落结构，且存在显著的交互效应。功能预测分析表明，生物质炭与有机物料配施降低了碳水化合物代谢和潜在植物病原菌丰度。有效磷、pH、全氮和速效钾是影响土壤微生物群落丰度和结构的主要因素。综上，羊粪与生物质炭联合施用可有效提升旱地红壤肥力，提高土壤微生物丰度，降低潜在病原菌数量，因而可作为改善旱地红壤肥力和维护土壤健康的有效措施。

关键词： 多花黑麦草   抗药性   生物活性   药剂筛选   防除效果  

摘要： 为明确多花黑麦草（Lolium multiflorum）对乙酰辅酶A羧化酶（ACCase）及乙酰乳酸合成酶（ALS）类除草剂的抗性现状，在河南省驻马店市麦田多花黑麦草发生严重区域采集了50个种群，采用整株生物测定法分别测定了其对唑啉草酯、炔草酯、啶磺草胺的抗性水平；另选择异丙隆、吡氟酰草胺、氟噻草胺、砜吡草唑、吡酰·异丙隆、啶磺草胺对其进行生物活性测定；并将砜吡草唑、氟噻草胺、啶磺草胺与吡酰·异丙隆混配开展田间药效评价。结果表明，供试多花黑麦草种群中，8个种群对唑啉草酯表现高水平抗性，GR50值（抑制杂草地上部分鲜重50%时所使用的除草剂剂量）在146.67～456.15 g（a.i.）·hm-2之间，抗性指数（RI）在10.68～33.20之间，占供试种群的16%;31个种群对炔草酯表现高水平抗性，GR50在101.82～446.40 g（a.i.）·hm-2之间，RI在10.36～45.41之间；16个种群对啶磺草胺表现高水平抗性，占总数的32%。除吡氟酰草胺和啶磺草胺外，其余4种除草剂（异丙隆、氟噻草胺、砜吡草唑、吡酰·异丙隆）对SC-3（最高水平抗性种群）的生物活性均较高，GR90分别为1 089.36、144.43、51.42、568.69 g（a.i.）·hm-2。从田间药效看，砜吡草唑与吡酰·异丙隆混配在供试剂量下对多花黑麦草的防效较好，鲜重防效可达94.27%～100%,且对小麦安全。因此，对于多花黑麦草发生严重的麦田，可采用该配方进行防治。

关键词： 膜曝气生物膜反应器   初期雨水   胞外聚合物   微生物群落   功能基因  

摘要： 针对初期雨水的污染负荷大和冲击性强等特征,本研究利用致密无孔膜构建膜曝气生物膜反应器（membrane aerated biofilm reactor,MABR）,考察MABR对初期雨水处理效果的同时,分析了MABR系统中胞外聚合物（extracellularp olymeric substances,EPS）和微生物群落特征。结果表明,MABR系统对COD、NH4+-N和TN的平均去除率分别达到90.90%、79.75%和43.75%,去除负荷分别为1.99、0.30和0.21 g·（m2·d）-1,该系统拥有较好的同步脱氮除碳效果。与未驯化接种污泥的EPS相比,蛋白质（protein,PN）和多糖（polysaccharide,PS）分别增加了19.37 mg·g-1和7.12 mg·g-1,这说明微生物在活动中释放出了更多的酶和营养物质,PN/PS的增加有助于维持生物膜形态结构的稳定性。三维荧光光谱分析结果表明,溶解型胞外聚合物（S-EPS）、松散附着型胞外聚合物（LB-EPS）和紧密附着型胞外聚合物（TB-EPS）的主要成分均为酪氨酸,这有利于生物膜的形成。微生物群落分析结果表明,生物膜内含有丰富的厌氧氨氧化、硝化和反硝化细菌。功能基因预测结果表明,MABR系统中的脱氮基因明显增加,可加速硝化和反硝化过程。以上研究结果可为MABR在初期雨水的工程应用中提供参考。