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关键词： 猪细小病毒   NS1蛋白   多克隆抗体   原核表达  

摘要： 本研究旨在制备PPV-NS1的多克隆抗体，并用猪细小病毒（PPV）和真核质粒pcDNA3.1(+)-NS1-3×Flag进行双重验证。首先将PPV的非结构蛋白编码基因NS1克隆至原核表达载体pETDuet，构建原核质粒pET-PPV-NS1。接着，将原核质粒pET-PPV-NS1转化至感受态*** BL21细胞中，经由1 mmol/LIPTG诱导以后，通过SDS-PAGE和Western-blot对NS1表达进行检测，结果表明，NS1基因在感受态细胞中得到了良好的表达。其次，将纯化后获得的NS1蛋白采用多点注射的方式对大白兔进行免疫，制备获得针对重组NS1蛋白的多克隆抗体。然后，将真核质粒pcDNA3.1(+)-NS1-3×Flag转染HEK 293T细胞；同时PPV感染ST细胞后收取蛋白样品，用上述制备的NS1多克隆抗体进行验证。结果显示，制备的NS1多克隆抗体具有良好的反应性和特异性。

摘要： 习题不仅起到巩固知识的功效,而且能助同学们系统归纳数学解题的基本方法,提升同学们的数学逻辑推理能力,为更好掌握数学知识奠定基础.1.习题呈现.如图1,直线a∥b,∠1=54°,∠2,∠3,∠4各是多少度?(人教版数学教科书七年级下册第17页第1题)2.题意透视.(1)这是基础又典型的“三线八角图”,题中有直线a∥b的条件,解答时,可以大胆使用平行线的性质.

关键词： 农村电商   生态系统   熵权   耦合协调  

摘要： 近年来，长三角区域农村电子商务发展迅速，信息、物流、金融等要素不断完善，农村电商生态系统逐渐形成。为厘清长三角区域农村电商生态系统各要素间的协调发展关系，以熵值法和耦合协调模型为方法，结合2017年至2022年间长三角区域农村电商相关数据对长三角区域农村电商生态系统协同发展水平进行评价分析。结果表明：长三角区域农村电商生态系统发展势头较好，各子系统间耦合度、耦合协调度逐年上升，但仍处于初级协调水平，且系统间耦合度与耦合协调度发展不同步，各地区的发展水平存在较大差距。因此，要加快区域融合，努力提高系统各要素发展质量，着力优化农村电商发展环境，以推动长三角区域农村电商生态系统高质量发展。

摘要： 笔者在高三《平面向量及其应用》的复习中,引导学生对一道作业习题进行探究,学生通过自主探究分享了几种解法并总结了思路历程.笔者再次对此问题进行深入思考,挖掘试题的本质及其他解法,进而反思高三复习的课堂教学,提出教学建议,现整理如下,与读者分享.

关键词： 同种免疫   复发性流产   发病机制   治疗原则   母胎界面  

摘要： 同种免疫紊乱在免疫型复发性流产中扮演了重要作用，约占免疫型复发性自然流产的2/3。现代生殖免疫学观点认为，正常的母胎免疫耐受是成功妊娠的前提，当这种免疫耐受平衡被打乱时，胚胎被视做外来的移植抗原物而产生免疫排斥反应，可能导致同种免疫型复发性流产。由于发病机制并不明确，目前对于同种免疫型复发性流产的诊断还缺乏特异性指标，采用排除性诊断；治疗采用静脉滴注免疫球蛋白被动免疫治疗和丈夫或第三者淋巴细胞主动免疫治疗，虽可使部分患者获益，但具体疗效和机制仍不明确，尚无循证医学证据证实其有效性，因而存在争议。本文将对同种免疫引起复发性流产的免疫机制及治疗原则进行简述。

关键词： 紫苏叶   水疱性口炎病毒(VSV)   甲型流感病毒(H1N1)   脑心肌炎病毒(EMCV)   抗病毒先天免疫   Ⅰ型干扰素  

摘要： 目的 探究紫苏叶醇提物（PFEE）的体内外抗病毒作用，阐明其激活抗病毒天然免疫进而发挥抗病毒作用的分子机制。方法 采用CCK-8法检测PFEE(100～800μg·mL-1)对A549细胞活力的影响；通过流式细胞术、实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、Western blotting探究PFEE(200、400、600μg·mL-1)对水疱性口炎病毒（VSV）感染A549细胞的抑制作用，通过qRT-PCR、Western blotting探究PFEE对甲型流感病毒（H1N1）的抑制作用，通过qRT-PCR探究PFEE对脑心肌炎病毒（EMCV）的抑制作用。构建VSV感染小鼠模型，qRT-PCR法检测肝、肺、脾组织中VSV-G的m RNA表达水平，检测肺组织白细胞介素-6（Il6）、肿瘤坏死因子α（Tnfα）、趋化因子配体10（Cxcl10）m RNA表达水平，Western blotting检测肺组织VSV-G蛋白表达。PFEE处理成纤维细胞（MEF）细胞12 h，转录组测序分析基因通路富集变化，qRT-PCR检测干扰素刺激基因（ISGs）(Ifnb1、Ifit1、Ifit2、Isg15、Ddx58)的m RNA表达，免疫荧光检测干扰素调节因子3（IRF3）核转位情况，Western blotting检测Ⅰ型干扰素（IFN-Ⅰ）通路上游转录因子IRF3、p-核因子-κB活化激酶（TBK1）蛋白磷酸化情况；PFEE处理VSV感染的干扰素受体敲除（IFNAR1-/-）A549细胞和野生型A549细胞，利用流式细胞术检测PFEE对VSV的抑制作用差异。结果 PFEE对A549细胞800μg·mL-1以下无明显细胞毒性。与模型组比较，PFEE具有体外抑制VSV、H1N1、EMCV病毒作用（P<0.01、0.001）;PFEE在VSV感染小鼠体内能抑制病毒和炎症因子的m RNA表达水平、显著降低VSVG蛋白表达（P<0.01、0.001）。转录组测序分析结果显示，PFEE上调干扰素相关基因及信号通路，结合qRT-PCR、Western blotting和免疫荧光发现，与对照组比较，PFEE能诱导ISGs mRNA的表达、促进TBK1、IRF3的磷酸化以及核转位（P<0.05、0.01、0.001）。与A549细胞比较，在IFNAR1-/-A549细胞中，PFEE的抗病毒作用被显著抑制（P<0.05、0.01、0.001）。结论 PFEE通过激活基于IFN-Ⅰ通路的抗病毒天然免疫应答在体内外发挥坑病毒作用。

关键词： 动脉粥样硬化   灯盏花乙素   内质网应激   细胞凋亡   Nrf2   PERK  

摘要： 目的 探讨灯盏花乙素调控PERK-Nrf2/ATF4-CHOP信号通路抗大鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)作用的具体机制。方法 将40只健康SD雄性大鼠随机分为正常组、高脂饮食组和灯盏花乙素低、高剂量组。适应性喂养1周后造模，正常组喂食普通饮食，其余组喂食高脂饮食并且腹腔注射维生素D3,同时给药组每日腹腔注射不同剂量的灯盏花乙素。12周后麻醉处理动物，取大鼠主动脉血及主动脉血管。将大鼠主动脉血管用苏木精-伊红(HE)染色以观察病理变化情况。检测组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和谷胱甘肽-硫转移酶(GSH-ST)以及总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)的含量。qRT-PCR方法检测组织中PERK、eIF2α的mRNA表达。Western blot方法检测组织中GRP78、p-PERK、PERK、p-eIF2α、eIF2α、ATF4、CHOP、Nrf2、Bcl-2、PUMA、caspase-3、caspase-12蛋白的表达。结果 HE染色结果显示，灯盏花乙素组内膜下的泡沫细胞及脂质沉积有所减少，证明其对血管内皮细胞具有一定的保护作用。灯盏花乙素降低TC、TG、LDL-C的水平同时升高HDL-C的水平。Western bolt显示灯盏花乙素可下调PERK、eIF2α的蛋白表达，并下调GRP78、p-PERK、p-eIF2α、ATF4、CHOP、PUMA、caspase-3、caspase-12以及上调Nrf2、Bcl-2的蛋白表达，证明灯盏花乙素发挥抗AS作用与其调控PERK-Nrf2/ATF4-CHOP信号通路密切相关。结论 灯盏花乙素通过调控PERK-Nrf2/ATF4-CHOP信号通路抑制内质网应激及细胞凋亡从而治疗AS。

关键词： 猪丁型冠状病毒   微滴式数字PCR   荧光定量PCR  

摘要： 为建立一种检测猪丁型冠状病毒的微滴式数字PCR定量方法，选择猪丁型冠状病毒M基因作为靶基因，设计并合成1组引物对和探针，并对反应体系及退火温度进行优化。结果显示：所建立的微滴式数字PCR定量方法检测猪丁型冠状病毒M基因的最低限为1.37 copies/μL，当模板浓度为100～104copies/μL范围内与检测值具有良好的线性关系（R2>0.99）；检测的批内、批间变异系数为0.63%～4.63%，均低于5%，检测10种猪常见疫病病原（PEDV、PRV、TGEV、SADS-Co V、Po RV、PPV、PRRSV、PCV2、CSFV、FMDV-O、FMDV-A）核酸均为阴性；对130份临床样品进行猪丁型冠状病毒检测，微滴式数字PCR方法敏感性高于行业标准推荐的荧光PCR方法。本研究成功建立了一种特异性强、灵敏度高、重复性好的猪丁型冠状病毒微滴式数字PCR定量检测方法，为猪丁型冠状病毒的早期检测、定量诊断以及疫病净化提供技术保障。

关键词： 中等职业教育   中职学校   生活技能   生活技能教育  

摘要： 中职学校生活技能教育是实现个体全面发展目标，建设现代职业教育体系，服务教育强国建设的有效途径。本研究基于“社会生态系统理论”分析框架，以中职学校生活技能教育开展实施的利益相关方为研究对象，选取在校学生、毕业生、家长、教师及企业负责人等五类共计26人进行访谈，分析中职学校生活技能教育的困境。研究发现，当前中职学校生活技能教育的困境主要有：在微系统层面，中职学校育人环境塑造乏力，这具体表现为课程设置与实际需求脱节，教师育人意识有待提升，同伴群体素质参差不齐；在中观系统层面，各主体间价值与目标难以协同，这具体表现为家校合作目标不一致，校企合作效果不佳；在外层系统层面，大众媒体示范、监管不力；在宏系统层面，社会正向价值引导不足。纾解中职学校生活技能教育困境，提升中职学校生活技能教育质量，需要从以下几方面入手：树立德技并修、着眼终身、回归生活的中等职业教育发展观念；确立提质培优、强师保障、三全育人的立德树人工作思路；构建家校共育、产教融合、凝聚共识的协同育人体系。

关键词： 天然免疫   免疫代谢   炎症   细胞死亡   免疫调控   免疫微环境   自身免疫   肿瘤免疫  

摘要： 2024年度，国内外免疫学领域持续发展，涌现出一系列免疫学原创理论和转化应用方面的重要研究成果。这些最新的免疫学研究成果丰富了对免疫与炎症根本原理的认识，为理解自身免疫性疾病、炎症性疾病、肿瘤等重大疾病的发生机制并发展新型有效的治疗策略奠定了重要基础。本文梳理讨论了2024年国内外免疫学研究的部分代表性进展，并展望本领域的重大挑战和发展前沿，不足之处敬请批评指正。