关键词:
鸡
APOC3基因
肌内脂肪
生物信息学分析
摘要:
研究旨在对鸡APOC3蛋白进行生物信息学分析及构建APOC3基因组织表达谱,并探究其对肌内前体脂肪细胞分化的影响。试验从NCBI(https://***/)数据库下载APOC3蛋白氨基酸序列并进行生物信息学分析;利用PCR技术扩增APOC3基因CDS序列,采用同源重组方法构建APOC3基因过表达载体;利用qPCR检测APOC3基因在鸡不同组织中的表达量,分析APOC3基因表达规律;利用差速贴壁法分离14日龄AA肉鸡胸肌原代肌内前脂肪细胞;在肌内前脂肪细胞中过表达APOC3基因,利用qPCR、油红O染色、检测甘油三酯(Triglyceride,TG)含量评估APOC3基因对肌内前体脂肪细胞分化成脂的影响。生物信息学分析结果显示,同源基因APOC3在鸡与火鸡之间序列保守度较高,与小鼠保守度最低;APOC3蛋白是定位于细胞外、无跨膜结构域的分泌型蛋白。组织表达分析结果显示,APOC3基因在肝脏中特异性表达。体外试验结果分析显示,与对照组相比,试验组APOC3 mRNA表达水平升高了60倍,细胞内脂滴含量极显著增多(P<0.01),甘油三酯含量显著增加(P<0.05),脂肪细胞分化相关标志基因过氧化物增殖物激活受体γ(Peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ)、脂肪酸结合蛋白4(Fatty acid binding protein 4,FABP4)、脂肪酸结合蛋白5(Fatty acid binding protein5,FABP5)、CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer binding protein alpha,C/EBPα)、脂蛋白脂肪酶(Lipoprotein lipase,LPL)mRNA的表达水平显著上升(P<0.05);APOC3蛋白与载脂蛋白A1(APOA1)、异质核核糖核蛋白A/B(HNRNPAB)、高温需求因子A3(HTRA3)、肿瘤坏死因子受体超家族成员6B(TNFRSF6B)、载脂蛋白D(APOD)存在相互作用。研究表明,鸡APOC3蛋白属于分泌型蛋白,其编码基因在肝脏中特异性表达且与火鸡之间保守序列相似度较高;鸡APOC3基因过表达能够促进鸡肌内前体脂肪细胞分化与脂质积累,相关结果为进一步阐明APOC3影响肌内脂肪沉积的分子机制奠定基础。