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关键词： 三七叶   体外模拟消化   活性成分   抗氧化活性   α-葡萄糖苷酶   皂苷  

摘要： 以三七叶为原料，建立体外模拟消化模型，测定消化过程中三七叶总皂苷、总酚、总糖和总黄酮等活性成分的含量，评估其体外抗氧化活性和α-葡萄糖苷酶抑制活性，进一步采用超高效液相色谱-质谱联用技术（UPLC-Q-TOP-MS）分析三七叶中26种单体皂苷的变化规律。结果表明：三七叶总皂苷、总酚含量在肠消化阶段达到最高，分别可达188.32 mg/g、17.43 mg/g；而总糖在整个消化过程中含量变化不显著；总黄酮在口腔消化阶段含量最高，为23.76 mg/g。同样，肠消化阶段三七叶展现了最强的体外抗氧化能力及α-葡萄糖苷酶抑制能力。其ABTS阳离子自由基清除能力、铁离子还原能力及α-葡萄糖苷酶抑制能力均呈现出先降低后升高的趋势，并在肠消化阶段达到最大值，分别为84.97%、37.8 mg/g、72.5%。进一步对三七叶中的单体皂苷进行分析，发现随着消化的进行，大分子量的人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Re、Rd裂解生成了C-K、Rg3、Rg5、Rk1等小分子量稀有皂苷。总之，三七叶经消化后仍具有较好的功能活性，其抗氧化、抑制α-葡萄糖苷酶等功能活性也随着消化过程的进行不断提高，并在肠道阶段达到最高值，可能与其活性成分的释放以及小分子稀有皂苷的产生等有关。论文可为三七叶在功能食品开发中的应用提供科学依据。

关键词： 加减理冲汤   胃癌细胞   细胞凋亡   线粒体途径  

摘要： 目的：探讨加减理冲汤（MLCD）不同提取物的抗胃癌活性并探讨其可能的分子机制。方法：分别获取加减理冲汤醇提液（MLCD-A）、水提液（MLCD-W）及醇水共提液（MLCD-AW）。选取5株胃癌细胞（MNK-45、AGS、MGC-803、SGC-7901、BGC-823）及1株胃上皮细胞（GES-1）进行细胞毒性评价，将筛选出的敏感细胞株作为实验细胞株，通过乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒评估细胞LDH释放量，Hoechst33342-PI染色法分析细胞凋亡形态学变化，ELISA法评估细胞内活性氧（ROS）含量变化，JC-1染色分析细胞线粒体膜电位变化，GreenNuc?活细胞检测试剂盒结合共聚焦显微镜观察细胞Caspase-3酶活性表达，qPCR法及Western blot法检测Caspase-3/-9基因/蛋白表达。结果：制备的MLCD三种提取液中，醇水共提液的出膏率及抗胃癌活性最佳，且对AGS细胞活性最好，MLCD-AW能使AGS细胞LDH释放量增加（P < 0.05，P < 0.01），细胞凋亡形态学变化明显，细胞内ROS含量增加（P < 0.05，P < 0.01），线粒体膜电位变化显著，Caspase-3酶活性表达增强（P < 0.01），Caspase-3/-9基因表达量增加（P < 0.05，P < 0.01），c-Caspase-3/-9蛋白表达量增加（P < 0.05，P < 0.01）。结论：MLCD-A、MLCD-W、MLCD-AW均有一定的抗胃癌细胞活性，且MLCD-AW抗胃癌活性最佳；线粒体途径可能参与了诱导胃癌细胞凋亡的调控。

关键词： 马赛病毒   eIF2/eIF5   RNA干扰   Tup1  

摘要： 马赛病毒(Marseillevirus)属于巨型病毒家族,是从单细胞生物阿米巴原虫体内分离到的,其基因组构成与其他病毒相差较大,包含多个与蛋白质翻译相关的基因,其中包括一个被注释为真核翻译起始因子eIF2/eIF5的基因,其是否确实参与蛋白翻译过程有待研究。本研究旨在探讨马赛病毒上海株(Mar-SH2016)编码的eIF2/eIF5基因——MarSH＿314在病毒复制过程中的功能。首先构建了过表达MarSH＿314的卡氏棘阿米巴细胞株,并采用免疫共沉淀和质谱分析识别MarSH＿314的互作蛋白。质谱分析未检测到MarSH＿314和细胞翻译相关蛋白的互作,但发现它与宿主转录抑制因子Tup1存在相互作用。为探讨其机制,使用siRNA干扰Tup1表达后,病毒复制显著被抑制。综上,本研究未发现MarSH＿314与翻译过程的直接关联,但部分结果表明其可能通过与宿主转录抑制因子Tup1的相互作用,影响病毒与宿主的其他生物学过程。

关键词： 超声联合微泡   乳腺癌   凋亡   内质网应激   Ca  

摘要： 目的:探讨超声联合微泡（ultrasound combined with microbubbles,USMB）促进乳腺癌细胞（MCF-7）凋亡的过程中,机械离子通道蛋白Piezo1的相关作用及其可能机制。方法:体外培养人乳腺癌细胞MCF-7,设置对照组、USMB组、Piezo1-siRNA+USMB组。流式细胞术检测各组细胞凋亡率。Western blot检测各组细胞中的Piezo1蛋白、凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase 3及内质网应激相关蛋白GRP78、Caspase 12的相对表达量。Ca2+荧光探针检测细胞内Ca2+含量。结果:USMB组MCF-7细胞凋亡率显著增高,Piezo1-siRNA+USMB组凋亡率较USMB组明显下调（P<0.000 1）。与对照组相比,USMB组凋亡相关蛋白Bax、Caspase 3及内质网应激相关蛋白GRP78、Caspase 12相对表达量上调,凋亡相关蛋白Bcl-2相对表达量下调,组间差异均有统计学意义（P<0.001）。与USMB组相比,Piezo1-siRNA+USMB组凋亡相关蛋白Bax、Caspase 3及内质网应激相关蛋白GRP78、Caspase 12蛋白相对表达量下调,凋亡相关蛋白Bcl-2相对表达量上调,组间差异均有统计学意义（P<0.01）。与USMB组相比,Piezo1-siRNA+USMB组细胞内Ca2+荧光强度明显减低。结论:USMB通过激活离子通道蛋白Piezo1,进而诱导内质网应激,并促进细胞内Ca2+水平增加,从而促进乳腺癌细胞（MCF-7）的凋亡。

关键词： 黑逍遥散   阿尔茨海默病   蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶3β(GSK3β)/核因子E   相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)信号通路   细胞凋亡   氧化应激  

摘要： 目的：探究黑逍遥散调控蛋白激酶B（Akt）/糖原合成酶激酶3β（GSK3β）/核因子E2相关因子2（Nrf2）/血红素加氧酶-1（HO-1）信号通路级联调控氧化应激和细胞凋亡防治阿尔茨海默病（AD）的作用及机制。方法：将90只4月龄雄性SD大鼠，随机分为空白组10只，假手术组（双侧海马各注射生理盐水1 μL）10只，其余70只双侧海马各注射β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42) 1 μL溶液复制AD模型。造模结束1周后，筛选出造模成功的大鼠50只，随机分为模型组、 盐酸多奈哌齐组( 0.45 mg·kg-1)及黑逍遥散高、中、低剂量组(15.30、7.65、3.82 g·kg-1)。1次/d，连续6周。Morris水迷宫试验观察各组大鼠学习记忆能力，HE染色分析AD大鼠海马形态学变化，原位末端标记法（TUNEL）染色观察大鼠海马CA3区神经元细胞凋亡情况，免疫荧光法（IF）检测大鼠海马CA1区神经元核抗原（NeuN）的表达，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测AD大鼠海马谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、谷胱甘肽-S-转移酶（GST）、过氧化氢酶（CAT），实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测Akt、GSK3β、Nrf2、HO-1 mRNA表达，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）/Akt、磷酸化糖原合成酶激酶3β（p-GSK3β）/GSK3β、Nrf2、HO-1相关蛋白的表达。结果：与空白组比较，模型组大鼠第5天游泳总距离显著增加（P<0.01）、目标象限滞留时间百分比显著缩短（P<0.01），神经元细胞数量减少，排列紊乱，胞核固缩，细胞结构不同程度的受损，海马神经细胞凋亡率显著升高（P<0.01），NeuN含量显著降低（P<0.01），GSH-Px、GST、CAT活性显著降低（P<0.01），海马Nrf2、HO-1 mRNA表达显著降低（P<0.01），p-Akt/Akt、p-GSK3β/GSK3β、Nrf2、HO-1蛋白表达显著降低（P<0.01）；与模型组比较，盐酸多奈哌齐组及黑逍遥散高、中、低剂量组第5天游泳总距离明显减少（P<0.05，P<0.01），目标象限滞留时间百分比明显延长（P<0.05，P<0.01），神经元细胞排列较整齐，胞核固缩减少，胞体清晰，海马神经细胞凋亡率显著降低（P<0.01），NeuN含量显著提高（P<0.01），GSH-Px、GST、CAT活性明显提高（P<0.05，P<0.01），海马Nrf2、HO-1 mRNA表达明显提高（P<0.05，P<0.01），p -Akt/Akt、p-GSK3β/GSK3β、Nrf2、HO-1蛋白表达明显提高（P<0.05，P<0.01）。结论：黑逍遥散可改善AD大鼠认知功能障碍和病理损伤，其机制可能是通过调控Akt/GSK3β/Nrf2/HO-1通路，抑制神经元细胞凋亡和增强抗氧化应激能力两方面来共同发挥神经保护的作用。

关键词： 温郁金   生物有机肥   根际微生物   高通量测序  

摘要： 该研究以连续种植温郁金（Curcuma wenyujin Y. H. Chen et C. Ling）的土壤为研究对象，通过高通量测序技术，研究施用不同肥料对温郁金根际微生物群落结构的影响。结果显示：施用生物有机肥能够改善土壤微生物的α多样性，增加Burkholderia-Caballeronia-Paraburkholderia、不动杆菌属（Acidibacter）等有益菌、功能菌的丰度，降低镰刀菌属（Fusarium）、茎点霉属（Phoma）等病原真菌的丰度。结果表明，生物有机肥可以通过提高土壤有益菌丰度、抑制病原菌富集，改善土壤微生物群落结构，为植物生长提供有利条件，从而减缓连作障碍的发生。

关键词： 猪日本乙型脑炎病毒   E蛋白   磁微粒   化学发光法  

摘要： 为猪日本乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）提供一种更快捷便利的血清学检测方法，本试验建立了猪日本乙型脑炎病毒E蛋白（JEV-E）抗体磁微粒化学发光免疫分析法（CLIA）。以原核表达的JEV-E作为抗原包被磁微粒，与待检血清和碱性磷酸酶标记的IgG抗体组成检测体系，定量检测猪血清中JEV抗体含量。结果显示，优化偶联条件后，最佳缓冲液pH值为5.0，最佳蛋白包被量为30 μg/mL，5% BSA作为封闭剂，最适免疫磁珠保存液浓度为1 mg/mL；优化反应条件后，选择碱性磷酸酶抗体稀释度为1∶20 000，血清反应时间5 min，碱性磷酸酶反应时间10 min，底物反应时间7 min；建立的磁微粒化学发光法的阴阳性临界点判断标准为24.99 U ；绘制受试者工作特征曲线（ROC），显示敏感性为99.5%，特异性为97.5%；该方法与猪细小病毒（PPV）、猪口蹄疫O型病毒（FMDV-O）、猪圆环病毒2型（PCV2）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪链球菌（SS）、副猪嗜血杆菌（HPs）的阳性血清均无交叉反应；批间、批内系数均小于10%；敏感度与商品化试剂盒对比无显著性差异；与商品化试剂盒的符合率为98.27%。上述结果表明，该方法操作简单，试验流程方便快捷，可为JEV的快速诊断提供新的技术支持。

关键词： 虾酱   发酵   原核微生物群落   内源环境   互作  

摘要： 虾酱是中国传统发酵水产品之一，其独特的风味受到发酵环境和微生物的共同影响。该研究通过测定内源环境(pH、氨基酸态氮、挥发性盐基氮、丙二醛和生物胺)对虾酱发酵品质进行评估。此外，采用高通量测序技术探究发酵过程中原核微生物群落的演替规律。结果表明，pH、氨基酸态氮、挥发性盐基氮和丙二醛含量分别为7.24～7.84、0.06～1.21 g/100 g、26.52～90.33 mg/100 g和0.11～1.62 mg/kg。色胺是虾酱中主要的生物胺，约占总生物胺含量的60%。研究发现，虾酱原核微生物群落的多样性和丰富度随发酵时间的延长而逐渐下降。盐厌氧菌属(Halanaerobium)、四联球菌属(Tetragenococcus)和乳杆菌属(Lactobacillus)是虾酱发酵后期的优势原核微生物属，发酵35 d后，其相对丰度之和可达86.78%。冗余分析表明，多个内源性环境共同驱动了虾酱发酵过程中原核微生物群落的演替。研究结果揭示了虾酱发酵过程中原核微生物群落与内源环境相互关系的动态变化，为精准人工调控提供了数据参考。

关键词： 海洋生物学   大黄鱼   Bmf   细胞凋亡   序列分析  

摘要： Bmf(Bcl-2-modifying factor)是Bcl-2家族中仅含BH3结构域促凋亡蛋白亚家族的一员，当凋亡刺激存在时，Bmf在真核生物细胞中启动细胞凋亡，从而在胚胎发育、器官发生、肿瘤抑制中发挥重要作用。目前，有关低等脊椎动物Bmf的研究较少，仅在斑马鱼（Daniorerio）中有相关报道。本研究通过序列比对、基因共线性分析及进化分析证实与高等脊椎动物Bmf主要以单个基因的不同剪切异构体形式存在不同，鱼类具有Bmf1、Bmf2两种不同的基因。从大黄鱼（Larimichthys crocea）中克隆获得了其Bmf2(LcBmf2)的开放阅读框序列，该序列全长561bp，编码187个氨基酸。尽管Lc Bmf2的氨基酸序列与人和小鼠Bmf的一致性较低，但具有对Bmf功能至关重要的DLC2结合基序和BH3结构域，提示其可能具有与哺乳动物Bmf相似的功能。大黄鱼Bmf2在HEK-293T细胞系中的过表达可诱导HEK-293T细胞脱壁、形态改变以及细胞内凋亡相关Caspase 3、Caspase 8的酶活性升高，展现出较强的促凋亡功能。这是鱼类Bmf在细胞与分子水平促细胞凋亡功能的首次报道，为进一步研究Bmf在鱼类细胞凋亡中的作用及分子机制奠定了基础。

摘要： 免疫系统功能紊乱是临床慢性疑难疾病,如恶性肿瘤、顽固皮肤病、风湿免疫病、老年性疾病等的重要机制之一,这些疾病日益成为威胁人类健康的重大威胁.中医药作为独特的医疗资源,发挥整体调节和以人为本的核心学术优势,治疗这些疾病疗效显著;中医药调控机体免疫功能是其发挥作用的关键机制.我们正在深入探索中医药与现代免疫学相结合的新路径,为免疫紊乱性疾病的防治提供了新思路、新方法.