关键词:
牛纽布病毒
VP1蛋白
病毒样颗粒
免疫原性
小鼠
摘要:
针对牛纽布病毒(bovine nebovirus, BNeV) VP1基因进行密码子优化并构建重组质粒pFastBac-Dual-VP1,使用杆状病毒表达系统制备BNeV-VP1病毒样颗粒(virus-like particles, VLPs)。采用Western blot、间接免疫荧光和电镜对其进行鉴定。将验证正确的VLPs与MF59佐剂、CpG-ODG免疫增强剂混合后免疫小鼠并评估其免疫效果。结果显示,优化后的VP1基因密码子适应指数(codon adaptation index, CAI)为0.93,GC含量为60.4%;将构建的重组质粒转化至DH10Bac进行蓝白斑筛选,验证成功后转染至SF9细胞,获得重组杆状病毒Baculo-BNeV-VP1;电镜下可观察到直径在35~40 nm的BNeV VLPs; IFA和Western blot试验均证明VP1蛋白可以成功表达并具有生物学活性;通过蛋白优化发现感染剂量MOI=0.5时蛋白表达量最高;将50μg VLPs与MF59佐剂和CpG-ODN混合后,以肌肉注射方式免疫小鼠,结果显示VLPs免疫组在首免后7 d产生IgG抗体,且抗体滴度逐步增加,于28 d达到峰值(1∶102 400),35 d时有所下降,但仍保持较高水平;阻断效价BT50最高为640,可诱导小鼠产生BNeV VP1特异性阻断抗体。结果表明,利用杆状病毒表达系统表达了BNeV的VP1蛋白,并成功构建了BNeV VLPs,其能诱导小鼠机体产生体液免疫反应,为后续BNeV疫苗研究提供了参考。