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关键词： 百草枯   小胶质细胞   糖酵解   代谢重编程  

摘要： 目的观察百草枯(paraquat,PQ)活化的小胶质细胞的代谢重编程变化。方法PQ和脂多糖(LPS,阳性对照)处理小胶质BV2细胞12 h,试剂盒法检测培养上清液中乳酸含量;实时定量PCR法测定TNF-α、IL-6、己糖激酶2(HK2)与葡萄糖转运体蛋白1(GLUT-1)的mRNA表达水平;Western blot法测定TNF-α、HK2和GLUT-1蛋白表达水平;细胞能量代谢分析仪测定细胞外酸化率,观察糖酵解效能的变化。结果与对照组相比,20和40μmol/L PQ组细胞培养上清液中乳酸含量升高(F=617.90,P<0.05),HK2、GLUT-1 mRNA和蛋白表达水平升高(F=6.51、F=82.92,P<0.05);各剂量PQ组TNF-α和IL-6 mRNA表达水平升高(F=429.80、F=1597.00,P<0.05),TNF-α蛋白表达水平上调(F=10.03,P<0.05)。PQ处理组细胞糖酵解压力曲线高于阴性对照组,细胞的基础糖酵解效能、细胞最大糖酵解效能和糖酵解储备效能基本以20μmol/L PQ组较高。结论PQ诱导的小胶质细胞活化过程伴有糖酵解作用的增强,提示PQ能使小胶质细胞发生代谢重编程。

关键词： 诱导多能干细胞   细胞分化   巨噬细胞   单细胞测序  

摘要： 目的·探究人诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cell,iPSC)来源的巨噬细胞(iPSC-derived macrophage,IPSDM)与人外周血来源的巨噬细胞(peripheral blood-derived macrophage,PBDM)的单细胞基因组学异质性。方法·利用无饲养层无血清方案体外诱导iPSC分化为IPSDM,通过流式细胞术及反转录实时荧光定量聚合酶链反应(real-time reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)分别检测IPSDM表面白细胞分化抗原14(cluster of differentiation antigen 14,CD14)与单核-巨噬细胞标志基因的表达情况。随后对IPSDM进行单细胞测序,同时从基因表达综合数据库中下载单细胞测序数据集GSE126085作为PBDM参考数据集。通过R软件seurat包处理分析IPSDM与PBDM测序数据,利用singleR包注释PBDM。以PBDM的高变基因构建参考数据集,利用scmap包将IPSDM的高变基因投影于PBDM,根据高变基因的相似性推断IPSDM的细胞身份。随后参考细胞类型注释工具及相关研究完成对IPSDM的注释,并比较IPSDM和PBDM巨噬细胞标志基因的表达分布。最后,利用seurat包寻找IPSDM与PBDM的差异表达基因(differentially expressed gene,DEG),通过基因本体(Gene Ontology,GO)分析与京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析探究DEG潜在的生物学功能。结果·体外诱导分化29 d后得到悬浮的IPSDM,经流式细胞术及RT-qPCR检测证实约23.1%的IPSDM表达CD14,且与U-937细胞系相比,IPSDM表达更高水平的单核-巨噬细胞标志基因。PBDM数据集中的细胞全部被注释为巨噬细胞,随后构建scmap参考数据集,将IPSDM的高变基因映射于PBDM参考数据集后发现59.8%的IPSDM可以依据PBDM的高变基因索引被注释为巨噬细胞,而余下40.2%的IPSDM细胞无法匹配PBDM的高变基因索引。进一步人工注释IPSDM发现其由97.15%巨噬细胞、2.71%造血前体细胞样细胞和0.14%树突状细胞组成。对IPSDM和PBDM的巨噬细胞标志物表达情况进行对比,发现两者均高表达典型的巨噬细胞标志物CD68基因,IPSDM还高表达组织驻留巨噬细胞相关的标志基因。对2种来源的巨噬细胞的DEG进行GO分析,发现分子功能主要富集于泛素样蛋白连接酶结合,细胞组分主要定位于核斑点和核膜,生物学过程主要富集于翻译调控;而KEGG通路富集分析的结果提示IPSDM与PBDM的DEG可能与多种胞内病原体感染相关。结论·人类IPSDM与PBDM在单细胞转录谱系上存在一定相似性及异质性,在转录组层面IPSDM更具有组织驻留巨噬细胞的特征,IPSDM与PBDM的差异基因可能与胞内感染免疫相关。

关键词： 植物分类学实验   教学实践   裸子植物   DNA条形码技术   ITS2   rbcL  

摘要： 植物分类学实验是高校植物学课程的重要组成部分,是学习植物分类学重要的实践环节。在传统教学中,教师多借助校园植物、标本馆、公园和自然保护区等场地,帮助学生快速建立植物分类的基本体系。随着生物技术快速发展,人们开始利用植物DNA中携带的遗传信息来鉴定植物种类,植物DNA条形码技术逐渐成为新兴的研究领域和植物鉴定手段。因此,在高校的植物分类学实验中引入植物DNA条形码技术,不仅可以加强学生对植物分类学知识的理解和掌握,还可以提高其分子生物学实验技能和科学实验素养。以校园常见裸子植物为例,利用ITS2和rbcL序列对其进行DNA条形码研究,探讨这些类群的亲缘关系,为准确鉴定提供分子证据。同时,提出基于植物DNA条形码技术在高校植物分类学实验中的教学设计,让学生从形态和分子角度理解常见校园植物的特征和演化关系。

关键词： 外源褪黑素   外源脯氨酸   叶绿素荧光   光合作用   气孔结构  

摘要： 寒潮引起的温度骤降是常见的低温胁迫之一。探明外源脯氨酸和褪黑素在寒潮下对美花红千层(Callistemon rigidus)适应能力的提升效果,初步解释其气孔密度、长度与光合能力的相互关系。通过设置500 ml双蒸水对照组(CK)、100μmol/L褪黑素(M)、100 mg/L脯氨酸(P)、100 mg/L脯氨酸+100μmol/L褪黑素(MP)4个组,在2022年第一次寒潮入侵时进行气孔结构和生理、光合指标的观测。研究结果为:(1)寒潮使美花红千层气孔长度(SL)下降,气孔密度(SD)上升,叶片净光合速率(Pn)和PSⅡ中最大光化学效率(Fv/Fm)降低,丙二醛(MDA)含量和叶片伤害度(Ⅱ)增加;(2)SD与气孔导度(Cond)为显著负相关,与叶绿素(Chl)含量有着显著正相关,SL与光化学淬灭系数(qP)呈极显著正相关、与脯氨酸(Pro)含量呈正相关,SD和SL呈极显著负相关;(3)施加外源物可以维持气孔形态,提高Pn和F_(v)/F_(m),降低MDA含量和Ⅱ,施加效果为MP>P>M。施加褪黑素可以提升Pn、Chl含量,施加脯氨酸提高叶片内Pro含量以维持细胞渗透压平衡。100 mg/L脯氨酸+100μmol/L褪黑素联合施加能够更全面地提高植物抗逆性,维持气孔结构稳定,减少细胞膜结构损伤,提高光合作用。

关键词： 喂养不耐受   人类免疫缺陷病毒   母婴阻断   中医证候   儿童  

摘要： 目的通过总结人类免疫缺陷病毒(HIV)母婴阻断新生儿喂养不耐受的中医证候特点,分析其病机规律,为中医辨证论治提供理论基础。方法对2018年1月至2023年12月广州医科大学附属市八医院收治的HIV母婴阻断新生儿喂养不耐受病例开展中医证候调查,由中医专科医师应用《HIV母婴阻断新生儿喂养不耐受中医证候调查表》进行相关信息数据的采集,对数据进行总结的基础上分析其中医证候特点和病机规律。结果纳入喂养不耐受HIV母婴阻断新生儿94例,主要症状及体征中居于前5位的分别是腹胀满68例(72.3%)、呕吐56例(59.6%)、纳差52例(55.3%)、黏液便45例(47.9%)、血便38例(40.4%)。中医证候分型概括为脾胃气虚证46例(48.9%)、脾胃阳虚证26例(27.7%)及气滞中焦证22例(23.4%)3种证型。脾胃气虚证和脾胃阳虚证的新生儿其胎龄及出生体质量均低于气滞中焦证的新生儿,差异有统计学意义(P<0.05),而母亲HIV感染时间在脾胃气虚证和脾胃阳虚证的新生儿中要长于气滞中焦证的新生儿,差异有统计学意义(P<0.05)。结论HIV母婴阻断新生儿喂养不耐受的病因主要为孕母失调遗患胎儿,病位在脾、胃与肠,病性以本虚为主,病机要点为脾虚失运、气机失调。

关键词： 糖尿病   施万细胞   JAK-STAT信号通路  

摘要： 目的探讨内质网分子伴侣复合物缺氧上调基因1(hypoxia up-regulated 1,HYOU1)对糖尿病施万细胞凋亡的影响及其机制。方法将对数生长期的施万细胞RSC96使用高糖培养基构建糖尿病周围神经病变细胞模型,并转染过表达HYOU1的质粒。利用RT-qPCR、Western blot检测HYOU1在RSC96细胞株的表达情况;利用CCK8、荧光显微镜、透射电镜和流式细胞术等技术检测HYOU1对RSC96细胞凋亡的影响;利用Western blot检测HYOU1对凋亡相关蛋白的影响,同时检测JAK-STAT信号通路相关蛋白,判断其对该通路的影响。结果RT-qPCR和Western blot实验结果显示,过表达HYOU1的RSC96细胞株成功构建。CCK8、荧光显微镜、透射电镜和流式细胞术结果表明,过表达HYOU1后,细胞活力显著升高,细胞凋亡数量显著减少(P<0.05)。Western blot实验结果表明,过表达HYOU1后,抗凋亡因子显著增加,促凋亡因子显著减弱,同时抑制了JAK-STAT通路的激活(P<0.05)。结论HYOU1可通过抑制JAK-STAT通路从而影响高糖诱导的RSC96细胞的抑凋亡作用。

关键词： 鸽Ⅰ型副黏病毒   F基因   遗传进化   生物信息学  

摘要： 【目的】了解上海地区鸽Ⅰ型副黏病毒(PPMV-1)流行毒株F基因遗传变异情况,分析F蛋白生物信息学特征,为PPMV-1的防控提供技术支持。【方法】应用RT-PCR方法扩增分离株F基因,测序并进行遗传进化分析,并通过生物信息学在线软件对F蛋白结构功能进行预测分析。【结果】分离株F基因编码区全长为1662 bp,编码553个氨基酸,F蛋白裂解位点序列为112R-R-Q-K-R-F117,符合强毒株序列结构特征。系统进化树分析结果显示,分离株属于新城疫病毒(NDV)ClassⅡ群Ⅵ.2.***.1.2.2亚型,与疫苗株La Sota和Mukteswar处于不同进化分支,与国内分离株Pi/SH/CH/0617/2013和pigeon/Ningxia/2068/2016同属Ⅵ.2.***.1.2.2分支。生物信息学分析结果表明,F蛋白为亲水性蛋白,分子质量约为59.03 ku,理论等电点(PI)为7.87,半衰期为30 h,不稳定系数为35.06,脂肪系数为109.73。F蛋白主要分布在细胞质膜和内质网中,具有跨膜结构和信号肽,包含6个潜在的N-糖基化位点、13个半胱氨酸残基、103个O-糖基化位点,以及67个磷酸化位点。二级结构中α-螺旋、无规则卷曲、延伸链、β-转角分别占46.11%、31.46%、18.08%及4.34%,三级结构预测结果与二级结构相一致。B细胞抗原位点预测结果显示,F蛋白含有11个抗原表位(氨基酸数目≥7)。【结论】本研究分离获得的PPMV-1分离株属于NDV ClassⅡ群Ⅵ.2.***.1.2.2亚型,其F蛋白具有较好的抗原表位,可作为PPMV-1疫苗研制和抗病毒治疗的靶蛋白。研究结果为有效防控PPMV-1感染提供了一定的参考依据,同时也为进一步研发新型疫苗奠定了基础。

关键词： 生涯教育   中小学生涯规划课程   生态系统理论  

摘要： 生涯发展贯穿人的一生,学校、家庭与社会共同构成中小学生涯发展的环境基础。山东省青岛市基于学生阶段性身心特点和发展需求,充分发掘影响学生生涯发展的环境因素,构建小学、初中、高中一体化的中小学生涯规划课程,以学段联合、内容整合、场域融合为导向,丰富课程类型,拓展课程资源,强化课程保障,促进中小学生涯规划课程的科学、持续发展。

关键词： 雪豹   种群结构   遗传多样性   微卫星标记  

摘要： 掌握雪豹(Panthera uncia)的遗传多样性信息对其保护和管理有重要意义。对104只雪豹个体的组织样品提取DNA,结合文献中提供的70个雪豹基因分型数据,利用9个微卫星多态性位点进行遗传多样性研究。结果显示:当样本量从70个增加到174个时,雪豹种群有分化为2个种群的趋势,即西北部群和中部群;共检测到45个等位基因(Na),中部、西北部2个种群平均每个位点Na分别为4.556和4.667,平均期望杂合度(He)分别为0.574和0.591,平均观测杂合度(Ho)分别为0.517和0.498。雪豹群体的平均近交系数(FIS)为0.137,平均遗传分化系数(FST)为0.067,平均多态信息含量(PIC)为0.602,种群间遗传变异为15.24%,种群内遗传变异为84.76%。9个微卫星位点具有中高程度多态性,与其他雪豹研究相比,2个雪豹种群遗传多样性处于中等水平,种群间遗传分化水平处于中等程度,遗传变异大部分来源于群体内部。研究结果对全球雪豹的种群结构和遗传多样性研究具有重要意义,也为雪豹未来的科学保护提供可靠的遗传背景。

关键词： 儿童   新型冠状病毒   脑病   MRI影像表现  

摘要： 目的 分析总结儿童新型冠状病毒感染后合并不同类型脑病的MRI影像表现,为临床及时、合理治疗提供影像信息。方法 回顾性分析16例经临床确诊为新型冠状病毒感染合并中枢神经系统受累患儿的临床及MRI影像资料,男9例,女7例,年龄13天~12岁。所有患儿均行MRI平扫及加扫扩散加权成像(DWI)序列。其中11例患儿于不同时期复查。结果 结合临床表现及实验室检查,8例患儿考虑为急性坏死性脑病,其中7例病变累及脑实质范围较广,MRI表现为双侧丘脑明显肿胀,呈对称性改变,T_(1)WI呈低信号,T_(2)WI及FLAIR呈高信号,DWI呈高信号,ADC呈“三色板征”,余双侧大脑半球内可见多发对称性斑片状DWI高信号;1例仅累及脑干,MRI表现为脑干明显肿胀,脑干内团片状异常信号,T_(1)WI呈低信号,T_(2)WI及FLAIR呈高信号,DWI呈高信号,ADC呈“三色板征”。2例患儿考虑为瑞氏综合征。MRI表现为双侧大脑半球皮层、基底节区弥漫性对称性T_(1)WI低信号,T_(2)WI高信号,FLAIR及DWI呈高信号,ADC减低。4例患儿考虑为急性脑病伴双向发作及后期扩散降低(AESD)。MRI表现为双侧额顶枕叶白质内对称性稍长T_(1)、长T_(2)信号,FLAIR呈高信号,DWI呈高信号,ADC减低,呈“亮树征”。2例患儿MRI表现为双侧大脑半球白质内分水岭区散在多发点片状T_(1)WI低、T_(2)WI高信号,FLAIR及DWI呈高信号,ADC减低,额顶叶片状T_(1)WI高信号,考虑为急性脑病合并血管病变。结论 儿童新型冠状病毒感染可合并急性坏死性脑病、瑞氏综合征、AESD及急性脑病并发脑血管病变,不同类型脑病MRI影像表现不同,总结其影像特征,提高诊断能力,为临床合理、及时治疗提供重要影像信息。