关键词:
自噬
脊髓损伤
运动能力
细胞凋亡
摘要:
目的探讨采用低剂量雷帕霉素激活细胞自噬对脊髓损伤大鼠运动能力的影响及其分子机制。方法 30只SD大鼠[河南省实验动物中心, 雄性, (200±15) g]按照随机数字表法分为对照组、脊髓损伤组和自噬激活组, 脊髓损伤组和自噬激活组采用改良Allen’s重物坠落建立脊髓损伤模型, 对照组作为假手术组。建模成功后, 自噬激活组大鼠尾静脉注射10 mg/kg雷帕霉素溶液, 对照组和脊髓损伤组大鼠尾静脉注射等体积生理盐水。治疗7 d后对治疗效果进行评估。采用苏木精-伊红(HE)染色分析3组大鼠脊髓组织病理学变化;采用改良后综合行为评分法(CBS)对3组大鼠运动能力进行评分;采用蛋白质免疫印迹分析脊髓组织自噬和凋亡相关蛋白水平的变化。采用神经元特异的烯醇化酶(NSE)染色分析神经元的数量变化;采用原位缺口末端标记法(TUNEL)染色分析3组大鼠细胞凋亡指数。组间两两计量数据比较采用LSD法。结果自噬激活组大鼠脊髓组织细胞自噬底物p62蛋白表达水平(0.39±0.11)低于对照组和脊髓损伤组大鼠(1.24±0.19、1.02±0.15), 差异有统计学意义(t=7.110、6.947, P<0.08)。自噬激活组大鼠治疗7 d后开放空间运动能力、脚趾伸展、触地反射、回缩反射、翻正反射、斜板试验等指标(16.89±2.54、2.01±0.58、1.98±0.68、2.98±0.84、3.87±1.11、9.99±1.35)高于脊髓损伤组大鼠(8.58±2.14、0.85±0.36、0.92±0.41、1.25±0.42、2.11±0.96、7.85±1.98), 差异有统计学意义(t=21.521、10.260、11.245、13.251、10.498、9.887, P<0.05)。自噬激活组大鼠脊髓组织病理评分[(3.58±1.05)分]低于脊髓损伤组大鼠[(7.25±1.98)分], 差异有统计学意义(t=8.942, P<0.05)。自噬激活组细胞脊髓组织细胞凋亡指数[(6.78±2.18)%]低于脊髓损伤组大鼠[(19.63±3.52)%], 差异有统计学意义(t=7.984, P<0.05)。自噬激活组大鼠脊髓组织细胞半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3和B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)蛋白表达水平(0.98±0.19、0.88±0.14)低于脊髓损伤组大鼠(1.54±0.29、1.31±0.25), 差异有统计学意义(t=6.471、5.879, P<0.05)。结论采用低剂量雷帕霉素激活细胞自噬, 有助于改善脊髓损伤大鼠运动能力, 可能通过激活自噬, 抑制神经元凋亡来实现。