关键词:
肾上腺皮质癌
杆状病毒凋亡抑制蛋白5
p53
自噬
摘要:
目的探讨杆状病毒凋亡抑制蛋白5(BIRC5)对肾上腺皮质癌细胞自噬和增殖的影响及其作用机制。方法分析肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库和GTEx数据库中77例肾上腺皮质癌组织和128例肾上腺正常组织中的差异基因。将差异基因和自噬相关基因交集, 得到5个上调基因和25个下调基因。对富集到的基因进行生存分析, 将生存分析差异最显著的基因进行单基因分析。使用Cytoscape和STRING进行HUB基因的提取并进行GO和KEGG分析。人源肾上腺皮质癌细胞系SW-13和NCL-H295作为研究对象, 分别转染空载质粒和BIRC5过表达质粒, 转染2 d后, 使用平板克隆形成实验验证细胞的增殖能力。采用蛋白质印迹实验探索BIRC5与自噬和p53之间的关系。两实验组间比较采用独立样本t检验。结果 BIRC5生存分析差异最显著(P<0.01)。BIRC5过表达组细胞克隆形成数高于空载质粒组(SW-13:832.000±29.933比575.333±19.619, t=10.140, P<0.05;NCL-H295:696.667±30.126比519.667±15.923, t=7.346, P<0.05);过表达BIRC5同时使用p53激活剂氟苯咪唑组细胞克隆形成数低于BIRC5过表达组(SW-13:560.667±26.247比675.667±13.021, t=5.551, P<0.05;NCL-H295:521.667±20.886比747.000±62.759, t=4.818, P<0.05)。过表达BIRC5组比空载质粒组在蛋白水平上, BIRC5能显著降低p53蛋白的表达(SW-13:0.610±0.093比0.855±0.031, t=3.556, P<0.05;NCL-H295:0.596±0.102比0.859±0.042, t=3.390, P<0.05)、升高磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)蛋白的表达(SW-13:0.867±0.024比0.612±0.098, t=3.575, P<0.05;NCL-H295:0.947±0.142比0.450±0.109, t=3.911, P<0.05)、降低LC3B蛋白的表达(SW-13:0.657±0.166比1.136±0.110, t=3.408, P<0.05;NCL-H295:0.391±0.040比1.116±0.089, t=10.540, P<0.05)。过表达BIRC5同时添加氟苯咪唑组比过表达BIRC5组能显著升高p53蛋白的表达(SW-13:1.074±0.037比0.610±0.093, t=6.582, P<0.05;NCL-H295:1.087±0.108比0.596±0.102, t=4.681, P<0.05)、降低p-mTOR蛋白的表达(SW-13:0.520±0.091比0.872±0.081, t=4.088, P<0.05;NCL-H295:0.570±0.133比1.062±0.019, t=5.159, P<0.05)、升高LC3B蛋白的表达(SW-13:1.194±0.085比0.514±0.082, t=8.143, P<0.05;NCL-H295:1.345±0.215比0.483±0.028, t=5.617, P<0.05)。结论 BIRC5能够通过p53/mTOR轴抑制肾上腺皮质癌的自噬并促进其增殖。