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关键词： 病毒性角膜炎   延续性护理   自我管理能力   护理干预   治疗随访   眼科门诊   家属参与   护理服务  

摘要： 病毒性角膜炎是眼科门诊的常见病、多发病,其患病率为0.11%,在感染性角膜炎中排名第一。提高治疗依从性和与患者之间的积极合作是提高临床治疗效果的重要保证。近年来,以医院为基础的延续性护理模式在临床的应用大大提高了患者就诊后的治疗随访水平。本研究通过对门诊病毒性角膜炎患者的延续性护理干预,以就诊后的护理干预为研究重点,建立标准化的延续性护理团队,制订统一的科学实施方案,不仅为病毒性角膜炎患者就诊后提供直接的护理服务,更重要的是帮助患者及其家属参与疾病管理,重视疾病的自我管理,形成良好的疾病管理行为,提高患者的自我管理能力,现报道如下。

关键词： mRNA疫苗   重组蛋白疫苗   混合免疫   免疫策略   新型冠状病毒  

摘要： 目的 评价新型冠状病毒脂质纳米颗粒包裹的mRNA疫苗(mRNA-LNP)与重组蛋白-铝佐剂疫苗(PS-Alum)混合免疫在小鼠体内的免疫原性,为不同技术路线疫苗联合免疫提供实验数据。方法 以mRNA-LNP和PS-Alum疫苗为研究对象,比较疫苗单独免疫及联合免疫雌性BALB/c小鼠的免疫应答水平。联合免疫策略分别为双侧免疫(bilateral)和混合免疫(mix),bilateral组在小鼠一侧胫骨前肌免疫mRNA-LNP疫苗,另一侧胫骨前肌免疫等体积PSAlum疫苗,mix组将mRNA-LNP与PS-Alum疫苗等体积混合后,分别接种小鼠两侧胫骨前肌;免疫1和2针后检测抗体反应,与单独免疫mRNA-LNP疫苗进行比较,评价混合疫苗的免疫效果。将mRNA-LNP与PS-Alum疫苗等体积混合,体外4℃放置0、48 h及7、14、35 d后免疫雌性BALB/c小鼠,检测抗体应答和细胞免疫应答,初步评价混合疫苗的稳定性。结果 mix组小鼠血清IgG结合抗体几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)在初免后第14天和加强免疫后第14天均高于mRNA、bilateral组(14 d:P分别为<0.000 1和0.243 9;35 d:P均<0.000 1);将混合疫苗体外4℃放置0、48 h及7、14、35 d后免疫小鼠,初免后放置48 h,小鼠血清IgG结合抗体GMT比0 h略有提升(P=0.017 7),随着放置时间延长,结合抗体GMT保持稳定;加强免疫后,相比0 h,随着放置时间延长,疫苗诱导的结合抗体、假病毒中和抗体和T细胞反应均未降低(P=0.421 1~0.999 9)。结论 制备mRNA-LNP与PS-Alum混合疫苗进行免疫,相比单独免疫可有效提升免疫原性,且混合疫苗在体外4℃放置35 d内免疫原性保持稳定。

关键词： 严重发热伴血小板减少综合征病毒   核蛋白   噬菌体展示   人源单克隆抗体  

摘要： 目的筛选严重发热伴血小板减少综合征病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)核蛋白人源单克隆抗体,鉴定单克隆抗体与重组核蛋白以及病毒颗粒中核蛋白结合特异性,测定其亲和力常数和结合动力学参数。方法运用噬菌体展示技术,从严重发热伴血小板减少综合征(severe fever with thrombocytopenia syndrome,SFTS)恢复期患者外周血中提取抗体基因,构建抗体文库。使用重组核蛋白对文库进行筛选,获得的抗体片段表达成IgG全抗。然后使用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)、蛋白印迹(western blot,WB)和间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)测定单克隆抗体与重组核蛋白以及病毒粒子中核蛋白的结合特异性,利用生物膜干涉技术(biolayer interferometry,BLI)测定抗体亲和力常数。结果成功构建了一个库容量为7.24×107的抗体文库,用核蛋白筛选获得6株抗体,命名为:NP-1、NP-10、NP-11、NP-20、NP-21、NP-27。6株抗体经间接ELISA,WB检测,均为核蛋白特异性单克隆抗体。经IFA检测,该组抗体也能特异性结合在病毒粒子中的核蛋白上。经BLI测定,6株抗体与核蛋白亲和力常数范围为0.47 nmol/L至32 nmol/L之间。结论从文库中获得的6株抗体为SFTSV核蛋白特异性人源单克隆抗体,且具有较高亲和力。该抗体可为SFTSV基础研究、诊断试剂开发提供候选抗体。

关键词： 白斑综合征病毒(WSSV)   荧光定量PCR   TaqMan探针   病毒检测   水产养殖  

摘要： 【背景】白斑综合征病毒(WSSV)是一种高度传染性和致命性的病原体,对全球虾类养殖业构成重大威胁。WSSV可通过水平传播和垂直传播迅速扩散,虾在感染WSSV 3~10 d内累积死亡率最高可达到100%。由于缺乏有效的预防和治疗措施,开发快速、准确和敏感的WSSV检测技术对及时诊断和实施控制措施至关重要。【目的】建立一种WSSV和对虾内参基因双重荧光定量PCR检测方法,提高WSSV检测的灵敏度和特异性。【方法】首先,基于WSSV基因组保守序列设计合成特异性引物和TaqMan探针,建立WSSV单重荧光定量PCR检测体系,经特异性和重复性试验证实,该方法对WSSV具有良好的特异性和重复性。在此基础上,设计合成凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)内参基因引物和探针,并对引物碱基进行优化替换,建立WSSV-对虾内参基因双重荧光定量PCR检测体系。【结果】敏感性试验结果显示,该双重检测体系对WSSV的检测下限可达15拷贝·μL^(-1),在6.6~6.6×10^(5)拷贝·μL^(-1)范围内,WSSV质粒标准品的起始模板量对数值与循环阈值(Ct值)呈良好的线性关系(R^(2)=0.9930)。同时,内参基因的引入可有效地区分样本中由核酸提取或操作问题引起的假阴性结果。【结论】综上所述,本研究建立的WSSV-对虾内参基因双重荧光定量PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可为WSSV的快速诊断及流行病学调查提供可靠的技术手段,对控制WSSV的暴发流行、保障对虾养殖业的可持续发展具有重要意义。

关键词： 野生玫瑰   迁地保护   成效评估   遗传多样性   遗传结构   SSR  

摘要： 野生玫瑰(Rosa rugosa)具有重要的经济价值、生态价值和育种价值,被列为国家二级重点保护野生植物。了解玫瑰野生种群和迁地保存种群的遗传多样性和遗传结构,可为其种质资源的保护及管理提供指导。本研究基于SSR分子标记对野生玫瑰开展迁地保护成效评估,结果显示:野生种群中以辽宁大连种群的遗传多样性最高,而吉林珲春种群最低。野生种群的总遗传变异(Ht)为0.3834、种群内遗传变异(Hs)为0.2803、种群间遗传分化系数(Fst)为0.2689,遗传变异主要存在于种群内。各种群的观测杂合度(Ho)均小于期望杂合度(He),杂合子缺失(Fis>0),群体间亲缘关系较近,存在一定程度的近交。合并后的迁地保存种群的等位基因数(Na)、Shannon's多样性指数(I)、观测杂合度、期望杂合度等均高于野生种群。以上结果说明,迁地保存种群遗传多样性高于野生种群,野生玫瑰的迁地保护对其种群遗传多样性恢复有正向作用,迁地保护成效较好,可为其他野生植物开展迁地保护提供借鉴。

关键词： 滇中高原   云南松   土壤微生物   氮沉降  

摘要： [目的]探究氮沉降下滇中高原云南松土壤化学性质及土壤微生物群落多样性和结构组成的变化特征,并分析土壤微生物与土壤化学性质的相关关系,为了解氮沉降下森林土壤生态系统养分循环变化趋势及观测土壤微生态变化提供科学依据。[方法]选取滇中高原云南松林土壤为研究对象,以CO(NH_(2))_(2)为N源,设置对照CK[N 0 g/(m^(2)·a)]、低氮LN[N 10 g/(m^(2)·a)]、中氮MN[N 20 g/(m^(2)·a)]和高氮HN[N 25 g/(m^(2)·a)]4个不同梯度进行模拟N沉降试验,测定分析土壤细菌、真菌群落结构及多样性和土壤pH、有机碳(TOC)、全氮(TN)、全磷(TP)、铵态氮(NH^(+)_(4)-N)和硝态氮(NO^(-)_(3)-N)的变化特征。[结果](1)在不同季节下,与CK相比各氮处理下土壤pH、TOC含量均降低,TN均升高,NH^(+)_(4)-N和NO^(-)_(3)-N均在MN、HN处升高;(2)细菌和真菌α多样性雨季均高于旱季;与CK相较细菌α多样性在2个季节下LN处上升,而真菌α多样性则在旱季LN处上升;(3)在旱季和雨季细菌优势菌门均为变形菌门、酸杆菌门和放线菌门,真菌优势菌门为担子菌门、子囊菌门和被孢菌门;(4)在旱季和雨季,细菌和真菌优势菌属与pH、TOC、TN、NO^(-)_(3)-N呈显著相关关系。[结论]氮沉降可以为土壤微生物提供NH^(+)_(4)-N和NO^(-)_(3)-N等有效养分,但由于氮沉降导致土壤酸化使土壤TOC含量降低,影响土壤微生物群落结构。

关键词： M-IBI指数   生态健康   微生物群落   细河  

摘要： 以阜新市细河为例,通过对上游农村段、中游城市段和下游农村段各采样点的监测分析,筛选确定6个M-IBI计算指标,并对河流生态系统健康进行评价。结果显示,细河的微生物多样性指数和水质在不同河段存在显著差异,其中上游农村段各采样点达到健康等级,中游城市段达到亚健康~健康等级,下游农村段达到一般~健康等级,研究成果为细河生态管理和保护提供科学依据。可以为阜新市河流生态系统的健康维护和管理提供参考依据。

关键词： 故障树分析法   医院照明系统   故障诊断分析  

摘要： 本文旨在通过故障树分析法(FTA)深入研究医院照明系统的潜在故障点,进而设计一套高效的故障诊断系统。照明系统作为医院日常运行不可或缺的组成部分,其稳定性直接关系到医疗安全和服务质量。通过故障树的构建和分析,本研究既定性地揭示了故障发生的可能路径,又定量地评估了各种故障模式的影响程度。同时,文章提出基于FTA的故障诊断系统设计方案,并通过RTU系统可靠性实验验证该方案的有效性。研究结果可为提高医院照明系统的可靠性和故障响应速度提供理论与实践依据。

关键词： 蚊媒病毒   辽宁病毒   刺扰伊蚊  

摘要： 目的对2023年在吉林省珲春市采集的蚊虫标本进行蚊媒病毒的核酸筛查及病毒进化特征分析。方法首先采用形态学方法对蚊虫标本进行分类鉴定,通过实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)方法对采集的蚊虫样本进行6种蚊媒病毒核酸筛查,包括版纳病毒(Banna virus,BAV)、卡皮罗病毒(Kadipiro virus,KDV)、辽宁病毒(Liaoning virus,LNV)、塔希纳病毒(Tahyna virus,TAHV)、盖塔病毒(Getah virus,GETV)和乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)。通过测序获取阳性样本的病毒基因组序列。结果本次调查共采集5490只蚊虫标本,包含刺扰伊蚊4400只(80.15%),中华按蚊1090只(19.85%),按采集的时间、地点、蚊种进行混样共获得41组样本。qRT-PCR检测显示,仅编号为JLHC2321的刺扰伊蚊样本呈LNV核酸阳性,其余样本对所检测病毒均呈阴性。针对LNV第10节段基因的系统发育分析显示,该株辽宁病毒与NE9731毒株亲缘关系最接近,属于II型分支。同时基于第10节段编码区(Coding sequence,CDS)的氨基酸序列分析显示,JLHC2321与II型参考株NE9731仅存在2个氨基酸差异位点。结论本研究首次在吉林省珲春市的刺扰伊蚊中检测出LNV,为该区域蚊媒病毒的监测和防控策略提供了重要的基础数据。

关键词： CRISPR-Cas9技术   基因敲除小鼠   ADP-核糖基化因子4   ADP-核糖基化因子5  

摘要： 本研究旨在构建宿主ADP-核糖基化因子4(ADP-ribosylation factor 4,ARF4)和ADP-核糖基化因子5(ADP-ribosylation factor 5,ARF5)基因敲除小鼠,明确ARF4和ARF5基因对寨卡病毒感染的作用。首先利用CRISPR-Cas9技术,获得ARF4和ARF5单基因敲除小鼠(ARF4KO和ARF5KO),并通过杂交繁育获得双基因敲除小鼠(ARF4KO/ARF5KO),通过PCR法鉴定小鼠基因型,定量RT-PCR法检测目标基因的敲除效果。之后,用寨卡病毒感染基因敲除小鼠,采集第2、4、6天小鼠血液和各组织样本,提取核酸后用RT-q PCR法检测病毒载量,用HE染色观察组织病理变化。结果显示,用ARF4和ARF5特异引物,分别在ARF4KO^(–/+)、ARF5KO^(–/–)以及ARF4KO^(–/+)/ARF5KO^(–/–)小鼠扩增到与目标基因大小一致的条带。RT-qPCR检测结果显示,ARF4KO^(–/+)小鼠各组织中ARF4mRNA水平显著降低,其敲除效率在37.8%-50.0%之间,ARF5表达水平无变化。ARF5KO^(–/–)小鼠组织中ARF5 mRNA完全敲除,ARF4无变化。ARF4KO^(–/+)/ARF5KO^(–/–)小鼠在肺、肾和睾丸中ARF4mRNA水平显著降低,ARF5完全敲除。最后,用寨卡病毒分别感染基因敲除小鼠和野生型小鼠。结果显示,与野生型小鼠相比,ARF4KO^(–/+)小鼠在各时间点血清中病毒载量均显著下降,但ARF5KO^(–/–)小鼠与ARF4KO^(–/+)/ARF5KO^(–/–)小鼠无明显变化。同时,与野生型小鼠相比,ARF4KO^(–/+)小鼠各组织病毒载量没有显著降低,但其大脑和睾丸的病理性改变减轻。本研究利用CRISPR-Cas9技术成功构建了ARF4和ARF5基因敲除小鼠,并证实ARF4是寨卡病毒感染必需的宿主蛋白,为后续深入研究ARF4和ARF5在寨卡病毒感染致病中的作用机制以及抗病毒药物研发奠定了基础。