关键词:
补肾活血汤
髓核细胞
外泌体
miR-222-3p
细胞凋亡
摘要:
目的通过分析补肾活血汤含药血清调控髓核细胞外泌体中的miR-222-3p表达,探索其抑制髓核细胞凋亡的作用。方法(1)将髓核细胞随机分为PBS组、空白血清组和含药血清组。空白血清组培养液中加入10%普通血清,含药血清组培养液中加入10%补肾活血汤含药血清,PBS组加入等体积的PBS。3组分别培养48 h收集标本,提取外泌体;透射电镜鉴定外泌体形态结构,Western blot鉴定外泌体溶酶体相关膜蛋白3(CD63)、肿瘤易感基因101(TSG101)蛋白表达,Real-time PCR检测外泌体miR-222-3p的表达。(2)外泌体共培养肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导髓核细胞模型,将髓核细胞分为空白组、模型组、空白外泌体组、含药外泌体组、Anti-miR-222-3p外泌体组;共培养24 h后,用流式细胞术检测髓核细胞凋亡率,Real-time PCR检测各组髓核细胞miR-222-3p的表达,Western blot检测各组髓核细胞磷酸化蛋白53(p53)、细胞色素c(Cytc)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)蛋白的表达。结果(1)与空白血清组比较,含药血清组外泌体数量增多(P<0.05),含药血清组外泌体标志蛋白CD63、Tsg101相对表达量均增加(P<0.05),含药血清组髓核细胞外泌体中miR-222-3p表达降低(P<0.05);(2)与模型组及空白外泌体组比较,含药外泌体组及Anti-miR-222-3p外泌体组髓核细胞凋亡率进一步降低,髓核细胞miR-222-3p表达减少(P<0.05),p53、Cytc、Caspase-1蛋白相对表达量降低(P<0.05)。结论(1)补肾活血汤含药血清可有效促进大鼠髓核细胞分泌外泌体,并抑制髓核细胞外泌体中miR-222-3p的表达;(2)补肾活血汤含药外泌体可减轻TNF-α诱导的退行性髓核细胞的病理损伤,并减少髓核细胞凋亡,其机制可能与抑制miR-222-3p及凋亡相关蛋白p53、Cytc、Caspase-1表达密切相关。