关键词:
藤梨根
胃癌
HGC-27细胞
IL-17通路
网络药理学
槲皮素
细胞迁移
细胞凋亡
摘要:
目的:采用网络药理学和细胞实验探讨藤梨根(Tengligen,TLG)调控白细胞介素(interleukin,IL)-17信号通路治疗胃癌的作用机制。方法:通过中医药整合药理学研究平台(Integrative Pharmacology-based Research Platform of Traditional Chinese Medicine,TCMIP)筛选藤梨根的活性成分和靶点,借助GeneCards、Uniprot数据库查找胃癌的靶点,并利用Venny 2.1.0获取两者的交集靶点。将交集靶点导入STRING数据库,构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络。通过Cytoscape 3.10.1软件进行网络拓扑学分析,根据Degree值筛选核心靶点。利用DAVID数据库进行基因本体(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析。将25只SD大鼠随机分为空白组5只和藤梨根组(0.3125 g·kg^(-1))20只,连续灌胃5 d,制备空白血清和含药血清。将HGC-27细胞分为对照组、空白血清组、12%藤梨根含药血清组(TLG-L)、24%藤梨根含药血清组(TLG-M)及48%藤梨根含药血清组(TLG-H),采用Transwell实验检测细胞的迁移能力,流式细胞仪检测细胞凋亡,ELISA法检测上清液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IL-6、IL-1β含量,Western blot法检测IL-17A、核转录因子-κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白表达水平。结果:藤梨根靶点159个,胃癌靶点1010个,两者的交集靶点95个。藤梨根治疗胃癌的核心靶点包括肿瘤蛋白p53(tumor protein 53,TP53)、IL-6、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,BCL2)、MMP-9、TNF等。KEGG分析得到123条通路,包括IL-17信号通路、PI3K-Akt信号通路、HIF-1信号通路等。与空白血清组比较,TLG-L组、TLG-M组、TLG-H组细胞迁移数目减少、细胞凋亡率升高(P<0.01)。与对照组比较,空白血清组细胞上清液中TNF-α、IL-6含量升高(P<0.01)。与空白血清组比较,TLG-L组、TLG-M组、TLG-H组细胞上清液中IL-1β、TNF-α、IL-6含量升高(P<0.01)。与对照组比较,空白血清组细胞MMP-9蛋白表达水平降低(P<0.01)。与空白血清组比较,TLG-M组、TLG-H组细胞IL-17A、NF-κB、MMP-9蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:藤梨根可能通过槲皮素、β-谷甾醇、谷固醇等成分,调控IL-17信号通路,从而发挥抑制胃癌细胞迁移,并促进其凋亡的作用。