关键词:
口腔鳞状细胞癌
毛兰素
天然化合物
促存活蛋白
髓样细胞白血病-1
细胞凋亡
细胞增殖
抗肿瘤机制
摘要:
目的探讨毛兰素(Erianin)对人口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞增殖和凋亡的影响,为OSCC的临床治疗提供研究基础。方法使用0、2.5、5、10μmol/L浓度的毛兰素处理OSCC细胞CAL27和SCC9;采用CCK-8和软琼脂集落形成实验检测毛兰素对OSCC细胞增殖的抑制作用。通过蛋白免疫印迹法(Western blot)分析毛兰素在OSCC细胞中对抗凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-超大(B-cell lymphoma-extra large,Bcl-xL)、B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、髓样细胞白血病-1(myeloid cell leukemia-1,Mcl-1)及凋亡蛋白裂解型半胱天冬酶3(cleaved-Caspase 3,c-Caspase 3)表达的影响。通过caspase 3活性检测试剂盒,进一步分析毛兰素在OSCC细胞中的促凋亡效应。通过质粒转染构建过表达Mcl-1的CAL27细胞,并通过Western blot和caspase 3活性测定分析Mcl-1对毛兰素作用于CAL27细胞的影响。获得湖南省肿瘤医院动物实验伦理委员会审批,构建CAL27裸鼠移植瘤模型并随机分为两组(n=5),给药组腹腔注射毛兰素(25 mg/kg),对照组注射磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)。利用免疫组化方法检测肿瘤组织中Ki67和Mcl-1的表达水平。结果毛兰素呈剂量依赖性地抑制CAL27和SCC9细胞的增殖,并下调了Mcl-1的蛋白表达,而对Bcl-2和Bcl-xL的影响较小。此外,毛兰素诱导OSCC细胞发生凋亡,表现为c-Caspase 3蛋白表达水平增加,caspase 3的活性增强(P<0.001)。过表达Mcl-1则可以抑制毛兰素诱导的c-Caspase 3蛋白水平的增加及caspase 3活性水平。体内实验结果与体外一致,毛兰素处理后,CAL27细胞在裸鼠体内的生长受到抑制(P<0.001),肿瘤组织中增殖相关分子Ki67及抗凋亡分子Mcl-1的表达水平下调(P<0.001)。结论毛兰素具有较好的抗肿瘤效果,能够有效抑制OSCC细胞的增殖并促使其凋亡,其机制可能涉及下调促存活蛋白Mcl-1的表达水平。