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关键词： 人偏肺病毒   急性呼吸道感染   基因分析  

摘要： 目的:了解2018—2021年无锡市人偏肺病毒(hMPV)的流行特征及F基因变异情况，为无锡市hMPV的防控提供参考依据。方法:采集2018—2021年无锡市两家哨点医院的急性呼吸道感染样本，采用实时荧光定量RT-PCR方法对采集的样本进行hMPV核酸检测，阳性样本进行F基因测序，使用Bioedit 7.0软件进行多序列比对，MEGA 7.0软件构建系统发生树，与相应参考株比对分析，确定基因型别及F基因变异情况。结果:2018—2021年hMPV总检出率为7.43%(616/8 292)，不同年份检出率差异有统计学意义( χ2＝ 84.312， P < 0.05)。3 ～ 5岁儿童检出率最高为9.71%(117/1 205)，冬春季为主要的流行高峰。经F基因测序，2018—2021年无锡市hMPV有3种亚型(A2b、B1、B2)，主要以A2b亚型为主，B1亚型主要集中在2018年1 ～ 4月，B2亚型在2020年12月至2021年2月期间成为优势流行株。31株A2b流行株与参考株(NCBI登录号：GQ153651)比较，核苷酸和氨基酸同源性很高(核苷酸同源性：96.20% ～ 99.50%，氨基酸同源性：97.90% ～ 100%)，仅3株流行株出现各1个突变位点;10株B1流行株与参考株(AY525843)比较，均有16个核苷酸突变位点，均仅有1个氨基酸突变位点(W396R);19株B2流行株与参考株(DQ843658)比较，均有10个核苷酸突变位点，B2流行株分为2个进化亚支(Ⅰ、Ⅱ)，Ⅰ亚支比Ⅱ亚支多4个核苷酸突变位点，均有3个氨基酸突变位点(D280 N、I392 T、R396Q)。 结论:2018—2021年无锡市hMPV的易感人群为3 ～ 5岁的儿童，冬春季为主要流行高峰，以A2b亚型流行为主，3种亚型与参考株比较氨基酸同源性高，遗传变异较小。

关键词： 轮状病毒   G3P基因型   分子特征   全基因组   抗原位点  

摘要： 目的:研究一株Wa-like中国G3P[8]-I5-A8基因型RVA重配株全基因组特征，并分析与RVA疫苗株的抗原表位之间差异。方法:采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法，对2023年中国青岛采集的一份G3P[8]基因型RVA标本进行全序列扩增。利用在线RVA自动分型工具(http：//***)对测序结果进行分型，应用MEGA 11.0、Geneious Prime 2023.2.1、Geneious 9.0.2和DNASTAR 5.1等软件对RVA毒株进行全序列遗传变异和进化分析。结果:成功获取一株G3P[8]基因型RVA(QD01)的全基因组序列，该毒株具有独特的类似Wa-like的基因型：G3-P[8]-I5-R1-C1-M1-A8-N1-T1-E1-H1。与RVA疫苗株RotaTeq?(G3)、LLR和Rotarix的VP7中和抗原表位对比有4～13个差异且均在抗原表位的关键位置7-1 b差异较大。结论:本研究RVA毒株QD01为G3-P[8]-I5-A8基因型，遗传进化分析推测该毒株可能是亚洲地区猪源RVA和人源RVA毒株间发生重配产生的新型毒株，QD01与RVA疫苗株在抗原表位的关键位置差异较大。

关键词： 流感病毒   免疫相关鸟苷三磷酸酶   细胞炎性因子   NF-κB   信号通路  

摘要： 目的:探讨免疫相关鸟苷三磷酸酶（IRGM）在流感病毒感染后引发的细胞炎性因子表达中的作用。方法:通过Western印迹法和RT-PCR检测PR8流感病毒株感染A549后IRGM基因和蛋白水平的表达，其次构建IRGM敲除的A549细胞并进行转录组测序，对所得到的差异基因进行KEGG富集分析。IRGM敲除的A549细胞感染PR8流感病毒株，PCR检测炎性因子IL-1b、IL-6，以及趋化因子CCL2、CCL5的基因表达，免疫印迹检测NF-κB、p-NF-κB的蛋白水平表达。STRING在线构建蛋白互作网络，Cytoscape软件解析核心子网络，drugbank数据库寻找预测小分子化合物。结果:相比未感染状态下，流感病毒感染12、18、24和48 h后，A549细胞中IRGM基因的mRNA表达分别上调了2.0、3.5、4.1和4.2倍，差异均具有统计学意义（ t=3.13、7.73、9.57和9.94;P值分别为0.034、<0.001、<0.001和<0.001），蛋白表达水平也均明显升高。与未敲除IRGM并感染PR8的细胞相比，IRGM敲除后炎性因子IL-1b、IL-6、CCL2和CCL5表达分别上调了2.6、2.8、3.3和2.8倍，差异均具有统计学意义（ t=3.75、5.07、6.60和6.75;P值分别为0.020、0.007、0.003和0.002）。IRGM敲除后的差异基因进行KEGG富集分析结果显示其主要富集在细胞周期、胞质DNA传感、甲型流感、细胞因子与趋化因子信号通路、Toll样受体信号通路。与未敲除IRGM并感染PR8的细胞相比，IRGM敲除后NF-κB信号通路活性升高。通过构建PPI蛋白互作网络并得到核心子网络，根据核心子网络基因使用drugbank数据库预测了10种小分子化合物，分别为N-甲基-L-亮氨酸、埃迪鲁单抗、肝素二糖Ⅰ-S、肝素二糖Ⅲ-S、二硫赤藓醇、4-(2,4-二甲基-5-噻唑) -2-氨基嘧啶、O6-环甲基己基鸟嘌呤、[4-(2-氨基-4-甲基-5-噻唑乙酸乙酯)-乙酰基嘧啶]-( 3-硝基苯硼酸)-胺、4-(2,4-二甲基-1，3-噻唑)-N-[4-三氟甲基苯乙胺]-2-氨基嘧啶、4-[(7-氧-7氢-噻唑并[5,4-E]吲哚-8-甲基)-磺胺嘧啶]）作为潜在的治疗药物。 结论:IRGM在流感病毒感染后表达上调，流感病毒感染过程中，IRGM缺失上调了相关促炎/趋化因子（IL-1b、IL-6、CCL2、CCL5）和NF-κB信号通路的表达，基于IRGM及其核心子网络的基因集，本文预测了10种小分子化合物可能作为潜在的治疗药物。

关键词： 伪狂犬病   猪疱疹病毒1型   脑炎   中枢神经系统感染   二代测序  

摘要： 目的:了解伪狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）脑炎患者临床特点。方法:采用描述性流行病学方法分析1例2019年5月就诊于河北工程大学附属医院的PRV脑炎病例。回顾国内外文献报道，综合分析12例PRV脑炎病例的临床特点、实验室检查及治疗。结果:共纳入PRV脑炎患者12例，男性11例，女性1例，所有患者发病前均有与生猪或猪肉相关直接或间接的接触史，伴有发热、头痛等前驱症状，表现为急性脑炎综合征、呼吸衰竭、视网膜炎或眼内炎等一系列累及中枢神经系统和呼吸系统的病变。经脑脊液二代测序均检测到PRV。患者头颅磁共振（MRI）诊断发现，病灶主要累及边缘系统、额颞叶、基底节区。12例患者均行抗病毒、抗癫痫治疗，11例采用糖皮质激素辅助治疗，10例联用免疫球蛋白。使用改良RANKIN量表（Modified Rankin Scale ，mRS）评分进行预后评定，其中11例≥3分。有1例患者死亡。结论:PRV脑炎患者以发热、头痛等为前驱症状，表现为急性脑炎综合征、呼吸衰竭、视网膜炎或眼内炎等一系列累及中枢神经系统和呼吸系统的病变。对于中枢神经系统感染急性发作的鉴别诊断应包括PRV脑炎，需进行头颅MRI、眼底检查和脑脊液二代测序等检查明确诊断，及早给予免疫球蛋白、糖皮质激素、抗病毒和对症支持治疗，改善预后。

关键词： 冠状病毒   双价纳米抗体   雾化给药   半数抑制浓度  

摘要： 目的:构建新型冠状病毒高亲和力广谱双价纳米抗体A2-A2，了解气雾化后的稳定性及给药效率。方法:原核表达和亲和纯化获得A2-A2。采用假病毒中和实验和生物膜层干涉实验评价A2-A2的中和能力和亲和力。肺部液体雾化给药器对A2-A2进行雾化，利用Western印迹法、ELISA、纳米颗粒跟踪分析技术评价A2-A2雾化前后性能和稳定性，同时通过雾化给药和腹腔注射2种方式对小鼠进行活体成像荧光分析和各器官抗体浓度检测，评估雾化式给药A2-A2在小鼠体内存留情况和递送到肺部的效率。结果:成功构建了新型冠状病毒双价纳米抗体A2-A2。A2-A2与SARS-CoV-WT、Alpha、Beta、Gamma、Delta、Omicron B.1.1.529、Omicron BA.5等毒株均具有良好的广谱中和作用和亲和力，中和活性的半数抑制浓度最低为0.3 μg/mL，亲和力最低为10 -12。雾化前后A2-A2活性、结构及颗粒大小（100~150 nm粒径范围占比71.3%）均未发生显著改变，具有良好的稳定性。A2-A2雾化式给药在小鼠肺部活体成像中留存近5 h，在小鼠解剖后肺中留存近24 h，浓度可达1.2 mg/mL，显著优于腹腔注射给药方式。 结论:双价纳米抗体A2-A2具有良好的稳定性，可通过雾化给药的方式有效到达肺部。相比于腹腔注射方式，A2-A2在肺部存留时间较长且具有更高的浓度。

关键词： 肝炎病毒,乙型   乙型肝炎表面抗原   乙型肝炎表面抗体   PreC区   C区   突变  

摘要： 目的:探讨HBsAg和抗-HBs共阳性慢性HBV感染者病毒基因组PreC/C区变异特征。方法:选取湖州市中心医院2020年11月至2021年12月收集的32例HBsAg和抗-HBs共阳性慢性HBV感染者为共阳性组，选取同期的32例HBsAg阳性而抗-HBs阴性的慢性HBV感染者为单阳性组，对血清中病毒基因组PreC/C区进行PCR扩增并测序，比较两组间PreC/C区基因核苷酸突变和氨基酸替换特征差异。结果:共阳性组共成功测序27例，单阳性组成功测序31例。共阳性组在C区2080、2189、2242三个位点的核苷酸突变率均高于单阳性组，差异有统计学意义( χ2=5.48、8.36和4.15， P值分别为0.019、0.004和0.042);在C区第97氨基酸位点突变率（51.85%，14/27）高于单阳性组（16.13%，5/31），差异有统计学意义( χ2=8.22， P=0.004)。共阳性组中C区B细胞表位（AA105-116）中的氨基酸突变率（40.74%，11/27）和突变频率（每100个氨基酸发生突变个数为7.10）显著高于单阳性组的氨基酸突变率（16.13%，5/31）和突变频率（每100个氨基酸发生突变个数为3.23），差异均有统计学意义（ χ2=5.43和4.30， P值分别为0.020和0.038）。 结论:共阳性者PreC/C区一些位点突变高于单阳性者，PreC/C区部分功能区域突变可能与共阳性者的病毒低水平慢性持续感染有关。

关键词： MxA   抗体   计算机模拟   亲和力提升   体外诊断  

摘要： 目的:开发针对粘液病毒抗性蛋白A(Myxovirus resistance protein A,MxA)的高亲和力抗体,旨在满足MxA体外检测试剂开发对抗体原料的高灵敏度需求.方法:通过传统杂交瘤抗体开发技术制备抗MxA抗体,结合计算机模拟手段,运用虚拟氨基酸突变等方法,对抗体进行结构优化.结果:计算机模拟技术确定抗原-抗体关键氨基酸位点为重链第 37、38、57、66、106、108、117 位,轻链第 34、36、38、56 位.对这些位点进行虚拟氨基酸突变,得到轻链ASN36→ARG突变抗体.亲和力分析显示该突变抗体比野生型抗体亲和力提高 2 个数量级,KD值达到 5.93×10-11 mol/L.结论:本文成功开发了抗MxA单克隆抗体,并通过计算机模拟技术使该抗体亲和力提升了 2 个数量级,为抗体的体外亲和力成熟提供了理论指导.

关键词： 轮状病毒   跨物种   基因重配  

摘要： 轮状病毒(rotavitus，RV)是一种光滑呼肠孤病毒科的双链分节段RNA病毒，是引起5岁以下婴幼儿急性胃肠炎(acute gastroenteritis，AGE)住院和重症的首位病因，也是儿童腹泻死亡的主要病因。由于RV的核酸为分节段特性，因此在RV复制过程中容易发生基因节段的重配。研究RV跨物种间的传播可以更清楚地了解RV的病原学特性，并且有助于揭示RV的传播途径，对疫苗研究和评估及防控策略的制定等均具有重大的意义。