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关键词： 肾着汤   甘姜苓术汤   膝骨关节炎   PI3K-Akt磷酸化   网络药理学  

摘要： 探讨肾着汤即甘姜苓术汤治疗膝骨关节炎（KOA）的作用机制。基于网络药理学分析肾着汤在KOA治疗中的关键靶点；在细胞实验层面，提取大鼠原代软骨细胞进行体外验证，末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP原位切口末端标记法（TUNEL）染色用于检测膝关节内软骨细胞的凋亡；蛋白免疫印迹法（Western blot）分析抑制细胞凋亡因子 (Bcl2)、（凋亡标志基因）Bax以及PI3K-Akt信号通路关键蛋白的表达。在动物实验中，构建60只7周龄雌性SD大鼠构建KOA模型，并随机分为对照组，模型组，肾着汤高、中、低剂量组，塞来昔布组，每组10只。通过计算机断层扫描（micro-CT）观察软骨关节面骨赘和骨密度的变化；苏木素-伊红（HE）染色和番红O固绿（SFO）染色观察软骨组织的病理变化；免疫组化检测炎症因子基质金属蛋白酶13（MMP13）以及软骨标志物Ⅱ 型胶原蛋白（collagen Ⅱ）的表达。通过定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）用于检测软骨维持细胞稳态蛋白（SOX9）、炎症标志物基质金属蛋白酶9（MMP9）、白细胞介素6（IL-6）和白细胞介素1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子（TNF-α）；首先，动物实验发现肾着汤有效改善KOA，通过micro-CT和HE、SFO染色，与对照组相比较，模型组大鼠关节表面明显形成骨赘并表现出粗糙，骨小梁体积分数（BV/TV）、骨小梁数量（Tb.N）和骨小梁厚度（***）均显著下降，而骨小梁间距（***）显著增加；而肾着汤组比较模型组的骨赘明显减少，且关节表面更为平滑，BV/TV、Tb.N和***显著提高，而***逐渐下降。在网络药理学分析中构建“肾着汤-成分-KOA靶点”网络图，定位KOA治疗中的核心靶点，并通过动物体内外实验进一步验证。大鼠膝关节组织病理切片免疫组化结果表明，与对照组相比较，模型组中MMP13显著增加，collagen Ⅱ减少；而肾着汤组能够抑制炎症，加强对关节软骨中collagen Ⅱ的保护。qRT-PCR结果显示，肾着汤组能够显著抑制IL-6、IL-1β、TNF-α、MMP9的mRNA表达，并上调SOX9的mRNA水平。体外验证结果表明，TUNEL检测脂多糖（LPS）诱导的模型组中，膝关节内软骨细胞凋亡显著增加，荧光强度显著升高；而肾着汤组则显著降低软骨细胞的凋亡趋势，荧光强度降低。Western blot结果表明，肾着汤组能有效抑制PI3K-Akt通路中蛋白磷酸化水平，减少Bax的表达，同时增加Bcl2的表达水平，并减少SOX9的降解。综上，肾着汤可能通过抑制PI3K-Akt信号通路关键蛋白的磷酸化表达，减少炎性因子的释放，并抑制软骨细胞的凋亡，从而缓解KOA的退行性损害。

关键词： 衣康酸   糖尿病   内皮功能障碍   细胞凋亡  

摘要： 目的：内皮功能障碍是糖尿病血管并发症的关键和起始因素，本研究旨在探讨4-辛基衣康酸（4-octyl itaconate,4-OI对糖尿病小鼠血管内皮功能的保护作用及机制研究。方法：通过db/db小鼠和高糖（high glucose,HG）诱导的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）分别建立糖尿病小鼠和细胞模型。经4-OI治疗后，采用苏木精-伊红（hematoxylin-eosin staining,HE）、Masson和网状纤维染色观察对照组、模型组和干预组小鼠胸主动脉的病理变化，并通过Western blot技术检测内皮纤维化标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）的表达；免疫荧光技术检测对照组、模型组和干预组小鼠胸主动脉Bcl-2关联X蛋白（Recombinant Bcl-2 Associated X Protein,BAX）和B淋巴细胞瘤-2基因蛋白（B-cell lymphoma-2 Protein,Bcl-2）的表达；免疫印记检测4-OI干预对HG诱导的HUVECs中BAX、Bcl-2蛋白表达的影响以及细胞色素C(Cytochrome c,CytC)/半胱氨酸蛋白酶（cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase）通路相关蛋白表达的影响。结果：4-OI可以明显改善db/db糖尿病小鼠血管内皮功能障碍。与模型组（BAX:1.89±0.12）/（Bcl-2:0.52±0.04）相比，干预组（BAX:1.41±0.14）/（Bcl-2:0.73±0.07）小鼠经4-OI治疗后可明显增加Bcl-2表达（F=49.38,P=0.009）和降低BAX表达（F=37.27,P=0.008）。在HG诱导HUVECs的细胞模型中，与高糖组（BAX:1.12±0.04）/（Bcl-2:0.81±0.09）/（CytC:1.01±0.03）/（Caspase-9:1.04±0.04）/（Caspase-3:1.74±0.04）相比，干预组（BAX:0.83±0.04）/（Bcl-2:1.22±0.04）/（CytC:0.61±0.03）/（Caspase-9:0.62±0.03）/（Caspase-3:0.92±0.06）经4-OI处理后Bcl-2表达明显增加（F=75.41,P=0.000）和BAX表达明显降低（F=268.1,P=0.000），同时CytC、Caspase-9、Caspase-3表达均明显下调（F=234.0,P=0.000;F=164.3,P=0.000;F=424.1,P=0.000）。结论：综上所述，4-OI通过影响CytC/Caspase通路因子的表达抑制db/db糖尿病小鼠血管内皮细胞凋亡，进而改善糖尿病血管内皮功能障碍。

关键词： 手足口病   肠道病毒   柯萨奇病毒A组6型   基因重组   安徽  

摘要： 目的 以安徽省2022—2023年柯萨奇病毒（Coxsackie virus, CV）A组6型（CV-A6）的全基因组序列为研究对象，探究其流行特征、重组模式及变异情况，以了解CV-A6的重组与进化之间的关系。方法 收集安徽省2022—2023年各地区的CV-A6阳性样本进行全基因组测序，利用MEGA11、SimPlot和DNAstar等软件进行基因组序列比对、系统进化分析和相似性分析，并对P1-P3编码区的氨基酸突变位点进行分析。结果 本研究共收集10株CV-A6测序株，10株CV-A6测序株之间核苷酸和氨基酸序列相似性分别为94.0%～99.7%和98.3%～99.9%，与CV-A6原型株相比核苷酸和氨基酸序列相似性分别为79.6%～80.1%和94.8%～95.1%。VP1系统进化树结果表明，10株CV-A6测序株均属于D3a基因亚型，与国内近年来流行的基因型趋势一致；重组分析结果显示，CV-A6测序株P1编码区序列较为保守，但在P2和P3编码区，CV-A6测序株与其他肠道病毒发生了一定程度的重组；3D区重组进化分析发现CV-A6测序株被分为RF-A和RF-K 2个重组分支，4株属于RF-A,6株属于RF-K；氨基酸突变位点分析显示，P1-P3区共检测到不同程度的氨基酸突变，RF-A和RF-K模式的测序株在3D区的突变规律有所不同，RF-A分支单独发生13处氨基酸突变，RF-K分支单独发生6处氨基酸突变。结论 安徽省2022—2023年CV-A6主要流行亚型为D3a亚基因型，且没有观察到其他新兴亚基因型出现的迹象，但3D区可能出现了一定程度的突变。

关键词： 结节性皮肤病病毒   A27L蛋白   可溶性表达   多克隆抗体  

摘要： 旨在获得结节性皮肤病病毒（LSDV）的重组A27L蛋白并制备其多克隆抗体，将密码子优化的A27L基因进行人工合成，随后克隆至pET-28a表达载体中，成功构建重组表达质粒pET-28a-A27L，将其转化入BL21(DE3)感受态细胞中，用0.5 mmol/L IPTG进行诱导表达，利用SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行分析。经优化表达条件获得分子质量约为19 kDa的可溶性重组A27L蛋白。采用High Affinity Ni-Charged Resin FF对可溶性表达产物进行纯化，成功获得高纯度的重组A27L蛋白，将其免疫新西兰大白兔4次后收集血清，Western-blot分析和间接免疫荧光鉴定结果表明A27L多克隆抗体可特异识别BHK-21细胞中表达的重组A27L蛋白。本研究利用大肠杆菌成功表达了可溶性重组LSDV A27L蛋白，并制备出特异的A27L多克隆抗体，为深入研究A27L蛋白的生物学功能以及研发结节性皮肤病疫苗和诊断技术提供了基础。

关键词： 小学语文   课后习题   核心素养  

摘要： 课后习题作为统编版教材助学系统中的重要一环,呼应了单元的人文主题和语文要素,是践行"素养导向"的重要抓手,教师要充分解读并利用好课后习题,精准设定教学目标,合理规划教学板块,高效实施课堂教学,助力学生语文核心素养的发展.教师可以依托课后习题,在揣摩用意中精准设置目标;应当聚焦课后习题,在设置支架中规划教学板块;可通过延展课后习题,在依循层级中渗透学习方法.教师要精准把握课后习题的编排用意,找准其与课文内容、单元语文要素之间的联系,释放课后习题真正的教学效能,为推动学生语文素养发展助力.

关键词： 新报告   抗病毒治疗   及时性   影响因素  

摘要： 目的 了解新冠肺炎疫情防控期间四川省新报告艾滋病病毒感染者/病人（以下简称HIV/AIDS）接受抗病毒治疗及时性的现状，分析相关影响因素。方法 通过国家艾滋病综合防治信息系统，收集2020—2022年四川省新报告HIV/AIDS病例的相关信息，采用SPSS 23.0软件进行单因素和多因素Logistic回归分析抗病毒治疗及时性的影响因素，以P<0.05为差异有统计学意义。结果 67 927例新报告HIV/AIDS病例中，80.81%及时接受抗病毒治疗。多因素Logistic回归分析结果显示：女性（OR=1.31,95%CI:1.24～1.38）、同性性传播（OR=1.37,95%CI:1.24～1.52）治疗及时性更高；婚姻状况未婚（OR=0.71,95%CI:0.67～0.76）、地区类别为省外（OR=0.27,95%CI:0.24～0.29），样本来源为医疗机构（OR=0.70,95%CI:0.65～0.75）和监管场所（OR=0.28,95%CI:0.24～0.33）、首次CD4细胞计数≥350个/μl(OR=0.85,95%CI:0.72～0.90)和未检测（OR=0.10,95%CI:0.09～0.12）的病例治疗及时性更低。结论 四川省新报告HIV/AIDS病例抗病毒治疗及时性较高，但还需加强男性、单身、省外户籍、医疗机构来源和首次CD4细胞计数较高等患者的管理，应有针对性的开展治疗动员与转介，从而提高及时治疗比例。

关键词： MALDI-TOF MS   蛋白指纹图谱   核酸质量图谱   病毒   鉴定与分型  

摘要： 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS）是一种新型软电离有机质谱。近年来，MALDI-TOF MS技术凭借操作简单、检测速度快、灵敏度高等优点，在微生物检测方面展现出巨大的应用潜力。然而，相较于MALDI-TOF MS应用于细菌和真菌检测的报道，该技术在病毒检测方面的报道相对较少。因此，本文就MALDI-TOF MS在病毒鉴定、分型、耐药基因检测中的应用进行综述，以期为该技术的后续应用提供思路。

关键词： 胰腺癌   细胞治疗   免疫治疗   嵌合抗原受体T细胞免疫治疗   T细胞受体  

摘要： 胰腺癌起病隐匿，恶性程度高，由于手术和化疗等传统治疗手段疗效有限，该肿瘤一直是病死率最高的恶性肿瘤之一。近年来，利用和改造患者自身免疫细胞来靶向和杀伤肿瘤细胞的细胞治疗方法，正逐渐成为替代传统治疗肿瘤的潜在方案之一，且在血液系统肿瘤中已取得了积极的效果。然而，细胞治疗在胰腺癌等实体肿瘤中仍处于研究阶段，虽取得了一定的疗效，但依然充满挑战。本综述深入探讨了嵌合抗原受体-T细胞（chimericantigenreceptor-Tcell, CAR-T）、 T细胞受体-T细胞（Tcell receptor-Tcell, TCR-T）和肿瘤浸润性淋巴细胞（tumor-infiltratinglymphocytes,TILs）等细胞治疗的作用机制，以及在胰腺癌治疗中的疗效；同时，初步分析了胰腺癌中细胞治疗效果不佳的主要原因，及当前改善细胞治疗效果的研究进展。

关键词： 猴痘病毒   动物模型   传播途径   感染致病  

摘要： 猴痘是一种由猴痘病毒引起的人兽共患疾病，已在全球蔓延。加快猴痘病毒传播途径、传播效率等相关研究的速度，建立各种动物感染模型与传播模型十分必要。因此，本文旨在综述国内外已经建立的猴痘病毒动物感染模型以及已知的猴痘病毒传播途径。目前，许多易感动物的猴痘病毒感染模型已经得到建立，涵盖不同动物种类、不同感染途径以及不同毒株类型等，并已经成功应用于解析猴痘病毒生物学特点的相关研究中。猴痘病毒可通过多种途径传播，如通过接触患者或患病动物，接触污染物传播，还可以通过飞沫、气溶胶等呼吸道途径传播，也可以通过性行为、母婴途径传播。考虑到猴痘病毒传播方式的多样性，我们需要采取多种应对措施才能减少疾病的传播，同时，应进一步建立更多能够模拟各种自然感染途径的动物模型，为猴痘病毒疫苗、药物研发和防控措施的制定提供技术支撑。

关键词： 口蹄疫病毒   VP1   RNF5   病毒组装  

摘要： 口蹄疫病毒（FMDV）编码四种结构蛋白，其中VP1蛋白是病毒表面的主要衣壳蛋白，在病毒入侵和抗原性方面发挥关键作用，决定病毒的致病力和组织嗜性。2025年1月17日，中国农业科学院兰州兽医研究所郑海学研究员带领的科研团队在PLoS Pathogens期刊上发表了题为“RING finger protein 5 is a key anti-FMDV host factor through inhibition of virion assembly”的研究论文，该研究揭示了环指蛋白5（RNF5）依赖其E3泛素酶活性介导FMDV VP1蛋白降解并限制病毒组装的功能机制，为广谱抗小RNA病毒药物的研发提供了理论依据，为抗病育种提供新思路。