关键词:
高效液相色谱法
脊髓灰质炎灭活疫苗
甲醛
含量测定
摘要:
目的建立Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Vero细胞)中游离甲醛含量柱前衍生-高效液相色谱检测方法,并进行验证及应用,以期为测定疫苗中游离甲醛含量提供新的方法。方法样品用2,4-二硝基苯肼衍生后,经C18色谱柱(5μm,120?,4.6 mm×250 mm)分离,分别对检测波长、流动相比例、流速、衍生时间、温度、缓冲液和衍生容器等检测条件进行优化,并对方法进行专属性、线性、重复性、准确性、检测限和定量限、耐用性验证。采用优化的方法检测20批脊髓灰质炎灭活疫苗(Vero细胞)中游离甲醛含量。结果色谱条件:以乙腈∶水体积分数70∶30为流动相,流速0.6 mL/min,波长352 nm进行测定;衍生条件:加入2,4-二硝基苯肼乙腈溶液0.5 mL和pH 5.0的缓冲液0.25 mL,60℃水浴20 min。该色谱分离条件能够有效分离2,4-二硝基苯肼及甲醛衍生物,且乙醛对测定结果无影响;甲醛标准品浓度在0.05~100μg/mL范围内与峰面积线性关系良好,r为0.9999;重复性试验中6次检测结果的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为0.36%;9份加标供试品溶液甲醛含量回收率在102.0%~107.0%之间;检出限和定量限分别为0.025和0.05μg/mL;样品衍生后48 h能够稳定存在,耐用性较好。同一批次样品结果重复性较好,甲醛含量在4.5~9.9μg/剂之间。结论建立的方法具有测定范围宽、线性好、准确性高等优点,能够对Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Vero细胞)中游离甲醛进行准确定量,可作为疫苗产品游离甲醛含量的辅助检测方法,对疫苗批签发和质量监管具有重要意义。