关键词:
梅花鹿
A型产气荚膜梭菌
细菌分离
耐药性
致病性
摘要:
2022年11月份,辽宁省某野生动物园梅花鹿陆续出现腹泻症状,甚至死亡,剖检发现皱胃黏膜出血明显,小肠黏膜出血,肠系膜淋巴结肿大,表现为肠毒血症特征,疑似产气荚膜梭菌感染。为进一步确定病原并了解其耐药性,试验首先无菌采集病死梅花鹿心脏、肝脏、肺脏、肾脏、脾脏和肠道内容物,进行细菌的分离培养;随后对分离菌进行生化鉴定、基因组DNA的提取与16S rDNA基因的PCR扩增,基于16S rDNA基因序列进行遗传进化分析;最后对分离菌进行了毒素基因的检测、小鼠致病性试验和耐药性分析。结果表明:从病料中分离纯化得到1株细菌,命名为LN202212。LN202212株在TSN琼脂平板上呈圆形、突起、光滑、湿润、中心环为黑色的菌落;在血琼脂平板上呈圆形、光滑、湿润灰白色菌落,菌落周围呈β溶血;革兰氏染色、镜检可见革兰氏阳性大杆菌,两端钝圆,呈单个或成对排列。LN202212株的酪蛋白、吲哚、脂酶、硝酸盐和甘露醇试验结果为阴性,卵磷脂酶、明胶、葡萄糖、麦芽糖和乳糖试验结果为阳性。LN202212株的16S rDNA基因序列与产气荚膜梭菌标准菌株ATCC 13124(登录号为MN326666.1)的核苷酸相似性为99.85%,与上海人源产气荚膜梭菌218002-301株(登录号为JQ940553.1)、印度豹源产气荚膜梭菌ATCC 13124株(登录号为MN326666.1)的亲缘关系较近。对LN202212株进行毒素基因检测,仅检测到α毒素cpa基因,其他6种毒素基因均未检测到,符合A型产气荚膜梭菌特点。小鼠接种分离菌24 h后陆续出现精神沉郁、行动迟缓、食欲减退、呼吸困难等症状,72 h后1只小鼠死亡(1/5),死亡小鼠肺脏明显出血,其他存活小鼠表现为肺脏出血,肝脏、脾脏淤血、肿大。病理切片可见部分肺泡破裂,肺泡腔内有血细胞,且有脱落的上皮细胞;肝细胞肿胀、变性,有出血和充血现象。LN202212株对恩诺沙星、先锋霉素V、头孢曲松敏感,对头孢噻肟、苯唑西林、红霉素中介,对林可霉素、青霉素G、四环素、链霉素、庆大霉素、丁胺卡那耐药。说明引起该野生动物园梅花鹿发病并死亡的病原为A型产气荚膜梭菌,该菌株仅对恩诺沙星、先锋霉素V、头孢曲松敏感,且对小鼠有明显的致病性。