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关键词： 工程化干细胞外泌体   糖尿病慢性伤口   血管生成   光遗传学   免疫微环境  

摘要： 糖尿病慢性伤口的血管新生和组织修复依然是一个亟待解决的临床问题。工程化的间充质干细胞来源外泌体在促进伤口愈合方面展现出巨大潜力。本研究通过基因工程和光遗传学技术改造并获得了富含e NOS的脐带间充质干细胞外泌体(UCMSC-exo/e NOS)并深入探讨其对糖尿病慢性伤口修复的影响和机制。我们首先通过基因工程手段构建了同时表达CIBN-EGFP-CD9和e NOS-m Cherry-CRY2两种重组蛋白的脐带间充质干细胞。蓝光照射下内源性表达的e NOS蛋白可通过CIBN-CRY2光控蛋白结合机制大量富集进入UCMSCs-exo,并通过超速离心法分离获得UCMSC-exo/e NOS。UCMSC-exo/e NOS体外显著促进了高糖环境中成纤维细胞和血管内皮细胞的增殖和迁移,同时降低了细胞内氧化应激造成的炎症因子表达水平升高和细胞凋亡。通过db/db糖尿病小鼠模型证明UCMSC-exo/e NOS显著提高了模型小鼠伤口的闭合速率,且改善了血管新生和基质重塑。进一步研究表明,UCMSC-exo/e NOS激活了多个磷酸化级联信号通路和信号分子,改善了伤口部位的炎症水平,并调节了伤口免疫微环境,发挥了有效的组织修复作用。本研究为糖尿病慢性创面的血管新生和组织修复提供了一种基于工程化干细胞外泌体的全新治疗策略。

关键词： 漆树   叶绿体基因组   谱系地理学   种群遗传学   景观基因组学  

摘要： 漆树(Toxicodendron vernicifluum(Stokes)***)是漆树科(Anacardiaceae)漆属(Toxicodendron)落叶乔木。漆树因―漆‖而得名,可割取生漆,同时兼具药用和材用等多种经济价值,在东亚地区具有悠久的栽培历史。近十年来,国内外对漆树的研究主要集中于次生代谢产物、解剖特征和生长特性等方面。前期学者虽然对中国、韩国和日本部分漆树居群的遗传结构开展了研究,但由于采样区域狭窄和样本量不足,所能提供的遗传信息有限。本研究将在漆树自然分布区内系统采样,综合分析叶绿体DNA和核基因组单核苷酸多态性(SNP)变异信息,进一步系统地阐明漆树天然居群的遗传变异格局。本研究采用叶绿体全基因组、叶绿体DNA片段和简化基因组测序技术,综合使用谱系地理学、群体遗传学、景观遗传学、系统发育分析和生态位模型等多种手段揭示漆树在东亚和中国的遗传结构,分析地形与气候等因素对漆树遗传变异格局的影响,推断漆树的谱系分化和种群动态历史,识别漆树核基因组中与环境变量显著相关联的SNP位点,并预测未来气候变暖情境下不同地区漆树居群的遗传脆弱性。本研究得到的主要研究结果和结论如下:(1)通过对中国东、西部的6个漆树及其近缘种野漆(***)、木蜡树(***)的叶绿体全基因组测序及变异分析发现,所测个体的叶绿体基因组均含有87个蛋白质编码基因、37个t RNA基因和8个r RNA基因。基于蛋白质编码基因的系统发育分析表明,漆树具有中国东、西部两个分支。从基因组成和顺序看,东、西部的漆树叶绿体基因组高度保守,但是它们之间仍然存在明显的差异。与中国东部漆树个体相比,中国西部漆树个体的叶绿体基因组长度更长,其大单拷贝(LSC)区、小单拷贝(SSC)区和反向重复(IR)区均更长。经比对后,在漆树叶绿体基因组内共检测到466个SNP和141个插入/缺失位点,其中大部分变异位点存在于东、西部分支之间。东、西部漆树叶绿体基因组的简单重复序列(simple sequence repeats)、长重复序列(long repeats)和串联重复序列(tandem repeats)数量接近,但互补长重复序列仅在中国东部个体中发现,反向长重复序列仅在中国西部个体中发现。所识别的漆树叶绿体基因组高度变异区域包括trn F-ndh J、rpl32-trn L、ccs A-ndh D、trn H-psb A、psb C-trn S、trn L-trn F、rpl32和rps19等,可用作后续漆树谱系地理学研究中的潜在分子标记。(2)基于两条叶绿体DNA序列(trn L和trn L-F)对中国、韩国和日本79个漆树居群的449株个体的遗传变异进行分析,共检测到7个单核苷酸变异位点,识别5种单倍型。漆树具有清晰的东、西部之间的谱系地理间断,且东、西部分支的地理分布大致以中国第二、三阶梯的分界线为界。西部分支的野生漆树个体主要集中分布于中国西部的―第二阶梯‖,如云贵高原、秦岭、大巴山和太行山等地,而东部分支的野生漆树个体主要集中分布于中国东部的―第三阶梯‖以及朝鲜半岛、日本等地。这一谱系地理间断比前期研究所揭示的结果更为清晰,涉及范围也更广,从亚热带地区(如雪峰山等地)延伸到暖温带地区(如太行山等地)。漆树的谱系地理格局反映了其在东、西部两个冰期避难所内经历了长期的地理隔离,进而发生异域分化。迁移矢量分析结果支持漆树自末次间冰期分布范围逐渐扩张,中国西部的山脉和东海大陆架可能是漆树的扩散廊道。结合化石记录和分子证据,本研究支持日本的漆树可能自然起源于中国东部,在冰期经东海大陆架扩散至日本。(3)基于四条叶绿体DNA序列(trn L、trn L-F、trn H-psb A和mat K)对中国39个漆树居群的357株个体的遗传变异进行分析,共检测到22个单核苷酸变异位点、5个插入/缺失位点和1个倒置片段,识别19种单倍型。中介网络图将所有单倍型分为东、西两大分支。BEAST分析表明,漆树东、西分支约在上新世晚期至更新世早期(2.38 Ma;95%HPD:1.45–3.68 Ma)分化,可能与青藏高原及其周围山地隆升和东亚夏季季风增强有关。在西部分支内,漆树具有三组特有单倍型,分别为云南怒江特有单倍型、贵州高原-武陵山特有单倍型和秦岭-大巴山特有单倍型;贵州高原-武陵山特有单倍型和秦岭-大巴山特有单倍型的气候生态位重叠程度较低,表明中国西部漆树存在微弱的南、北分化。遗传界限分析支持将漆树划分为中国东部、秦岭-大巴山、贵州高原-武陵山和云南怒江等优先保护单元;位于分布区边缘的安徽黄山(AHH)居群和山西交口(JIK)居群与邻近居群遗传分化明显,亦可作为独立的保护单元;受复杂山地地形因素影响,贵州高原-武陵山地区的邻近漆树

关键词： 水生动物重测序   单核苷酸多态性   群体遗传学   软件   基因组  

摘要： 为了帮助水生动物学研究者解决群体遗传学基础分析的困难，本实验在调研现有的水生动物重测序数据分析研究和成果的基础上，基于水生动物群体遗传学的常用方法和通用分析软件，构建可于本地运行的、能够完成大部分基因组重测序数据基础计算的软件包。软件包首先将质控过滤后的重测序数据与参考基因组序列进行比对，利用比对结果检测基因组的遗传变异，对群体进行系统发育分析、群体结构分析、主成分分析、遗传多样性重要量化指标的计算和选择性消除分析等，并通过R或Python语言工具包对分析结果进行可视化。根据该软件包对来自3个群体、共约30尾大黄鱼个体的简化基因组测序数据进行分析测试的结果，完成了软件包携带的测序数据比对、单核苷酸多态性(SNP)鉴定、系统进化树构建、群体结构预测、连锁不平衡检测和多样性指标等计算功能，并且较好地图形可视化了分析结果。该群体基因组重测序分析的简易软件包可用于野生和自然群体的群体遗传学分析的大部分基础统计、计算和绘图，适合包括水生生物学在内的相关领域的生物学研究者进行群体基因组学研究。本研究为水生动物重测序数据分析提供便利，节约科研时间，减少人力物力成本。相关源码和使用说明文档已公开上传至GitHub:https://***/xqteng/Re-seq＿analysis。

关键词： 多发性骨髓瘤   NLR   细胞遗传学   预后分层  

摘要： 目的探究初诊多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者外周血中性粒细胞/淋巴细胞的比值(Neutrophil to Lymphocyte Ratio,NLR)与细胞遗传学的相关性,探索NLR对初诊MM患者预后分层的价值。方法选取2011年12月-2021年12月赣州市人民医院就诊的MM患者200例作为研究对象,并将其设置为研究组,收集MM患者的基本资料,如:肌酐、血红蛋白、中性粒细胞计数、淋巴细胞计数、D-S分期、ISS分期等。同时将同期赣州市人民医院体检科开展体检的110例健康人群作为研究对象,并将其设置为参照组。将MM患者初次化疗前的外周血检验结果作为依据,计算出相应的NLR数值,对两组患者的外周血NLR数值开展统计学分析。利用ROC曲线确定敏感度、特异性。利用统计学软件计算出研究组患者NLR的截断值,随后将200例MM患者按照NLR数值是否>4分为两个亚组,即低NLR组141例患者(NLR≤4组)、高NLR组59例患者(NLR>4组),进一步分析NLR与细胞遗传学之间的相关性。随后开展单因素、多因素分析,明确其对初诊MM患者预后的影响,进一步对初诊MM患者预后进行分层,筛选出影响初诊MM患者预后的独立因素与指标。结果1.初诊MM患者与健康人群在NLR水平方面存在明显的统计学差异,初诊MM患者NLR水平明显高于健康人群,P<0.05。2.高NLR组的初诊MM患者比低NLR组的初诊MM患者更容易出现贫血、血小板减少、髓外浸润等问题,P<0.05。高NLR组的初诊MM患者细胞遗传学FISH中TP53异常、RB-1缺失表达的阳性率明显高于低NLR组的初诊MM患者,P<0.05。3.根据单因素分析结果显示:TP53异常、RB-1缺失、1q21扩增、髓外浸润、HB≤85g/L、NLR>4与初诊MM患者的无进展生存时间(PFS)显著相关,P<0.05。TP53异常、1q21扩增、髓外浸润、HB≤85g/L、NLR>4、LDH>200U/L与初诊MM患者的预后总生存时间(OS)存在显著相关,P<0.05。4.根据多因素分析结果显示:NLR>4、TP53异常、HB<85g/L是影响初诊MM患者预后不良的独立危险因素,P<0.05。5.根据生存曲线可知NLR>4的初诊MM患者PFS、OS中位时间较NLR≤4的初诊MM患者低,P<0.05。***>4的初诊MM患者,其中TP53检出异常者与TP53检出为无异常者之间的预后PFS、OS存在明显的统计学差异,P<0.05。结论1.相较于低NLR组MM患者,高NLR组MM患者细胞遗传学TP53异常、RB-1缺失率更高,这表明MM患者的NLR水平与细胞遗传学的阳性发生率存在明显的正向相关。2.相较于高NLR组MM患者,低NLR组MM患者经治疗后预后效果更为明显,疾病缓解率更高。3.高NLR提示初诊MM患者预后不良,这表明除D-S分期、ISS分期外,还可将外周血NLR水平作为预测初诊MM患者预后分层的指标。

关键词： 头颈鳞状细胞癌   生物钟基因   ROR_β   肿瘤生物学   预后  

摘要： 背景:目前研究表明,核心生物钟基因RORβ异常表达与多种癌症的发生发展密切相关。然而,RORβ在头颈鳞状细胞癌（Head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC）中的表达情况及作用机制仍不清楚。目的:探讨RORβ在HNSCC中的表达改变情况、临床意义及预后价值;分析HNSCC中RORβ的遗传学改变及调控机理;研究RORβ敲减后对HNSCC肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学表型的影响;分析HNSCC中RORβ与肿瘤微环境改变的相关性。方法:第一部分:通过TIMER数据库分析RORβ在泛癌与癌旁组织中的基因表达差异;检索TCGA数据库和GEO的两组独立数据集,下载RORβ在HNSCC样本和癌旁组织样本中的基因表达谱和临床信息资料,分析RORβ在HNSCC与非配对/配对癌旁组织中基因表达差异;通过免疫组化方法和Western Blot实验,验证RORβ在HNSCC患者癌组织和配对癌旁组织中的蛋白表达差异。第二部分:分析TCGA数据库中HNSCC患者的临床信息资料及临床HNSCC患者的病例资料,通过卡方检验,分析RORβ基因及蛋白表达变化与HNSCC患者临床变量的相关性。同时,采用Kaplan-Meier生存分析和单因素/多因素Cox回归分析,评估RORβ对HNSCC患者预后的影响。建立ROC诊断曲线和列线图模型,评估RORβ对HNSCC的诊断价值和预测患者预后的能力。第三部分:1.使用UALCAN、c Bio Portal、Meth Surv数据库分析HNSCC中RORβ基因改变、拷贝数变异、突变和DNA甲基化,及RORβ基因改变和DNA甲基化对HNSCC患者预后的影响。采用Kruskal-Wallis检验,分析HNSCC与癌旁组织中RNA m6A甲基化调控基因的表达差异,根据Spearman相关性检验,分析RORβ与RNA m6A甲基化调控基因的相关性。2.根据Spearman相关性检验,分析TCGA HNSCC mRNA matrix全基因组与RORβ表达的相关性,用Student t检验筛选出HNSCC和癌旁组织中的差异表达基因,以及HNSCC组织中RORβ高/低表达组的差异表达基因。同时,使用Gene MANIA和STRING数据库筛选与RORβ具有相互作用的分子,将上述基因集进行GO/KEGG分析和GSEA富集分析,以研究RORβ基因的功能。3.通过CCLE数据库挑选出人头颈鳞癌细胞系CAL27,进行细胞表型实验验证;构建包装RORβ敲减慢病毒载体,构建稳定沉默RORβ的CAL27细胞株;应用MTS和细胞克隆形成实验,检测沉默RORβ对HNSCC肿瘤细胞的体外增殖功能学影响;应用细胞划痕和Transwell侵袭实验,检测沉默RORβ对HNSCC肿瘤细胞的体外迁移和侵袭功能学影响。4.使用TIMER数据库及R package GSVA分析免疫细胞浸润水平与RORβmRNA表达的相关性,并且比较HNSCC样本RORβ高/低表达组中免疫细胞浸润水平的差异;分析HNSCC患者RORβmRNA表达水平与免疫细胞标记物及免疫检查点分子的相关性;采用Kaplan-Meier生存分析,评估免疫细胞对RORβ高/低表达组HNSCC患者预后的影响。结果:第一部分:RORβmRNA表达在HNSCC、膀胱癌和结直肠癌等19种癌症中显著降低;TCGA数据库及GEO数据库中2个独立数据集分析结果均表明:RORβmRNA在HNSCC中的表达显著低于癌旁组织（P<0.01）。免疫组化及Western Blot结果显示:HNSCC患者癌组织中RORβ蛋白表达水平显著低于配对的癌旁组织（P<0.01）。第二部分:RORβ在HNSCC中低表达与患者肿瘤病理分化低、肿瘤体积大、颈部淋巴结转移数目多、临床分期晚及生存时间短显著相关（P<0.05）。Kaplan-Meier生存分析发现:RORβ低表达组HNSCC患者的总体生存期、疾病特异性生存期和无进展间隔期显著低于RORβ高表达组（P<0.05）。RORβmRNA表达对HNSCC的诊断AUC值为0.705,Nomogram模型对HNSCC患者总生存期的预测C指数为0.643。第三部分:1.遗传学分析表明:HNSCC中RORβ改变率为1.33%,突变频率为0.6%。表观遗传学分析表明:HNSCC中RORβ启动子甲基化水平显著高于癌旁组织（P<0.05）,且RORβ高甲基化组的HNSCC患者预后更差;RORβ表达与METTL3和METTL14等15个RNA m6A甲基化调控基因表达显著相关（P<0.05）。***β相关差异基因的GO/KEGG富集分析结果表明:RORβ具有细胞黏附分子组成、肌动蛋白结合等分子功能,与PI3K/AKT信号通路和细胞因子受体相互作用信号通路等通

关键词： 英汉翻译   信息文本   交际翻译理论   语序调整   翻译策略  

摘要： 本文是一篇翻译实践报告。本翻译项目原文选自大卫·戈尔茨坦（DavidGoldstein）《遗传学的终结：人类DNA的设计》（TheEndofGenetics,DesigningHumanity’sDNA）第四、五章。选文主要探讨遗传学与人类身体健康之间的密切联系;通过识别确定遗传病因，设计生殖基因组进行预防，从而确保子代远离这些疾病。　　本报告主要由翻译项目描述、原文分析、理论基础、翻译案例分析和翻译实践总结五部分组成。译者从语义学和语用学角度分析，根据功能将这些插入语主要分为三类：语义补充、修辞和衔接。并在纽马克的交际翻译理论指导下，提出了相应的解决办法——语序调整,结构重组，融合法，切分法和顺译法。译者希望通过灵活整理和转换，有效解决翻译项目中的难点，帮助读者更好地理解原文。

关键词： 黄鲫   基因组组装   群体遗传学   遗传多样性   高通量染色体  

摘要： 黄鲫(Setipinnatenuifilis)属于鲱形目(Clupeiformes),鳀科(Engraulidae),黄鲫属(Setipinna),广泛分布于西北太平洋及印度洋沿岸海域，是中国近海渔业的主要捕捞对象。随着捕捞强度的逐渐增大，我国黄鲫资源出现衰退，一些海域的黄鲫种群已经出现了小型化和性早熟的趋势。近年来全球气候变暖、环境污染等问题也可能对黄鲫群体的生存和发展造成一定的影响。了解本地适应的空间尺度和与适应性遗传变异相关的因素对于有效保护和管理黄鲫种群资源非常重要。本研究对黄鲫的全基因组进行测序和组装，然后对黄鲫基因组的进化特征进行分析，另外利用微卫星(microsatellite)和单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism,SNP)分子标记对中国沿海的黄鲫进行群体遗传学研究，同时对黄鲫适应性遗传变异相关的环境变量进行分析。本研究主要结果如下:　　1、利用高通量PacBio和Illumina测序技术对黄鲫全基因组进行测序和初步组装，然后通过高通量染色体构象捕获(High-throughchromosomeconformationcapture,Hi-C)技术将基因组的contig序列锚定到24条染色体上，最后组装得到的黄鲫基因组大小为798.38Mb,其中contigN50和scaffoldN50分别为1.43Mb和32.42Mb。在黄鲫基因组中，预测得到了23,112个蛋白质编码基因，其中22,019个基因的功能被成功注释;另外还注释得到338.17Mb的重复序列和7,533个非编码RNA。分歧时间显示黄鲫与刀鲚(Coilianasus)大约在56.1(37.8～75.6)个百万年前开始分化。黄鲫基因组显著扩张以及特有基因家族都在与免疫系统相关的通路中显著富集。黄鲫与近缘物种的染色体共线性分析表明鲱形目鱼类在演化过程中发生了染色体融合或断裂事件。　　2、对黄鲫基因组中的微卫星序列进行统计，共鉴定得到2,381,723个微卫星位点，其中二碱基重复类型最多，有1,977,278个，占总数的83.02％。利用开发得到的16个微卫星位点对中国沿海9个黄鲫地理群体共180个个体进行群体遗传学研究，结果显示黄鲫群体具有较高的遗传多样性。遗传结构分析表明黄鲫南北群体间存在显著的遗传分化，其中秦皇岛、大连、青岛、连云港和南通地理群体可划分为北方群体，而霞浦、汕头和湛江地理群体可划分为南方群体;在舟山样本中检测到北方和南方群体的“混群”。　　3、利用限制性酶切位点关联DNA测序（Restriction-site-associatedDNAsequencing,RAD-seq）技术对中国沿海9个黄鲫地理群体共173个个体进行群体基因组学分析。多样性分析显示舟山样本有着较高的遗传多样性，而湛江样本的遗传多样性相对较低。遗传结构分析结果表明这9个地理群体可划分为南北两大群体，而南方群体可进一步划分为两个亚群（南方a和南方b亚群）;并且支持舟山样本存在混群现象。种群动态历史分析显示南北群体在更新世有着不同的有效群体大小变化曲线。基因型-环境关联分析显示温度因素比其他测试的环境变量更能解释等位基因频率变异。冗余分析（redundancyanalysis,RDA）和基于FST的BayeScan分析共识别得到5,552个潜在的适应性SNP,其中1,719个SNP在两种方法中共享。基于共享SNP数据集，共鉴定得到2,126个候选适应基因，功能富集分析显示这些基因在氧转运、TOR信号、脂质转运蛋白活性等通路中富集。　　综上，本研究完成了黄鲫全基因组测序，组装得到了质量较高的黄鲫染色体水平基因组，并揭示了黄鲫基因组适应性演化的特点;区分了中国沿海地区南北两个黄鲫遗传群体，其中南方群体可进一步划分为两个亚群;明确了环境因子特别是温度对黄鲫遗传变异空间模式的驱动作用。以上结果为黄鲫以及其他鲱形目鱼类的生物学和遗传学研究提供了有价值的基因组资源，同时为我国黄鲫群体管理保护单元的科学划分提供了理论依据。

关键词： 阿尔茨海默病   凝血因子Xlll   基因   遗传学  

摘要： 目的：探讨凝血因子Xlll Val34Leu基因突变与散发性阿尔茨海默病（Sporadic Alzheimer's disease, SAD）的关系。方法：应用聚合酶链反应-单链构象多态性（Polymerasechainreaction-single-strandconformation polymorphism, PCR-SSCP）技术与随机测序的方法检测128例SAD患者和136例健康老年人的凝血因子Xlll Val34Leu基因突变。结果：在阿尔茨海默病组发现了1例凝血因子Xlll 基因Val34Leu突变的杂合子，正常对照组不存在凝血因子Xlll Val34Leu基因突变。结论：凝血因子Xlll Val34Leu的突变可能与中国人群的散发性阿尔茨海默病无关。

关键词： 满月蛤科   索足蛤科   系统分类学   种群遗传学   谱系地理  

摘要： 满月蛤目Lucinida是双壳纲在化能生态系统中多样性最高的类群。由于其中大多物种具有特殊的化能生活方式、广泛分布在不同地理区域和生态环境,在深海和浅海栖息地都具有较高的多样性,满月蛤目成为化能共生、种群遗传以及深浅海适应和演化等研究的良好材料,具有极高的研究价值。但中国海满月蛤目的现有研究十分不足,缺乏系统的、与国际最新研究接轨的分类学研究,导致很多物种仍在使用无效种名、存在错误鉴定,物种的分类特征和物种间亲缘关系较为模糊,据估计还有很多种类尚未被发现和报道。国内基础研究的缺乏限制了对该类群进一步的研究和利用,因此对中国海满月蛤目系统性的分类学研究十分有必要。本研究通过广泛调查标本及文献记录,整理出最新的中国海满月蛤目物种名录,共包含39种,其中满月蛤科Lucinidae 6亚科22属35种,索足蛤科Thyasiridae 2属4种;修改了我国以往沿用的分类系统,修改异名10种;为中国满月蛤目物种名录新增15种,其中一个是在南海深海冷泉喷口处发现的新种:椭满月蛤Elliptiolucina subovalis。对其中大部分类群进行了详细的形态描述和讨论,同时记录了相关的生境、分布等信息,提供了各阶元对应的分类检索表。通过对大量样品的观察,认为南海皱满月蛤Rugalucina vietnamica种内形态变异较大,我国原本记录在海南的豌豆毛满月蛤Pillucina neglecta为错误鉴定。通过最大似然法和贝叶斯法对159个物种三个基因（18S r RNA、28S r RNA和Cytb）串联的数据进行系统演化分析,结果显示满月蛤目分为满月蛤科和索足蛤科,满月蛤科又分为七个单系分支,对应着七个亚科;其中各科和亚科之间的演化关系较为明确,但许多属仍存在分子结果与形态相似性不一致的问题。针对其中椭满月蛤属Elliptiolucina的多系问题进行了研究讨论,结合形态及分子证据提出椭满月蛤和***与该属模式物种***更相近,而巨椭满月蛤***可能非该属物种。通过系统演化分析,结合物种的分布深度,发现满月蛤科起源于浅海,其中多个谱系分别入侵至深海并演化形成了较高的多样性,随后这些深海分支中有部分物种又重新回到浅海,从而形成了满月蛤复杂的深浅海演化关系。在厘清分类系统的基础上,本研究对两种南海广布满月蛤物种,斯氏印澳蛤Indoaustriella scarlatoi六个群体119个个体和南海皱满月蛤Rugalucina vietnamica四个群体92个个体,利用COI基因作为分子遗传标记进行了比较谱系地理学研究。遗传多样性参数计算结果显示两物种在南海均表现出高单倍型多样性（***,h=0.881;***,h=0.674）和低核苷酸多样性（***,π=0.00277;***,π=0.00217）,这表明它们在近期发生了瓶颈效应后的快速种群扩张,很可能与最近的冰期间冰期海平面变化有关,中性检验和错配分布曲线的结果也基本支持这一推论。分化系数和单倍型网络图显示斯氏印澳蛤在南海的大多种群之间存在大且显著的遗传分化(F>0.25,p<0.05),尤其以北部湾各种群和南海其他种群之间基因交流障碍最明显,完全没有共享单倍型,这再一次印证了琼州海峡作为海洋生物群体遗传断点的论断。推测影响琼州海峡两侧基因交流的原因可能是冰期海平面下降导致的地理隔离和多种海流因素导致的基因交流受限,如穿越琼州海峡的海流常年自东向西流动且在东部湾口处存在许多影响幼虫扩散的涡旋、穿越琼州海峡的海流难以到达北部湾湾顶等。阳江海陵岛种群与其他种群之间也存在显著的分化(F=0.4375-0.5798,p<0.05)。南海皱满月蛤群体随地理距离变化表现出较小（或无）到中等的遗传分化(F=-0.0314-0.2645),与斯氏印澳蛤相比,单倍型网络图、分化系数和遗传距离等分析均显示琼州海峡并未对其造成显著的基因交流障碍,这可能是由于该物种除大量生活在红树林附近栖息地外,还可以分布在较浅的潮下带中的海草床及其他软泥底质中。相比于斯氏印澳蛤受红树林影响的斑块分布,南海皱满月蛤在南海的分布更连续,因此受上述基因交流障碍的影响较小。本研究通过系统分类学厘清并修订了中国海满月蛤目的物种名录和分类系统,梳理了中国海已报道的满月蛤目种类,澄清了以往报道中混淆种、疑难种、误鉴定种的分类地位,为以后的准确鉴定提供了信息;通过两种南海广布满月蛤的种群遗传学研究确定了琼州海峡对海洋生物基因交流的阻碍作用以及两物种对相同地理和水文障碍产生不同群体遗传结构的原因。本文为我国满月蛤目的研究打下基础,有助于改善我国对满月蛤目分类和系统演化关系的认知,而且对理解海洋生物的分化与演化、海洋生物多样性形成亦有

关键词： 男性不育   弱畸形精子症   DNAH3   基因敲除小鼠   内动力蛋白臂  

摘要： 目的:男性不育是一个世界性的健康问题,弱畸形精子症是导致男性不育主要原因。近年来,遗传缺陷引起的弱畸形精子症备受关注,许多致病基因被陆续报道。目前已知13个DNAH家族成员中有11个分子与男性不育相关,其中7个分子缺陷导致弱畸形精子症。然而,DNAH3分子与男性不育以及弱畸形精子症之间的关系仍然不清晰。本研究旨在探究DNAH3分子缺陷是否为弱畸形精子症的遗传学病因,为该类患者的诊断和治疗提供新的理论基础。方法:本研究通过对募集到的432例弱畸形精子症患者进行全外显子组测序(WES)检测,筛选候选致病基因突变。采用PCR-Sanger测序技术在患者及其家系中验证筛选到的候选突变。随后我们通过HE染色、电镜观察和免疫荧光实验观察患者精子形态与轴丝超微结构的变化。接下来,我们构建候选基因敲除小鼠模型,进行生育力鉴定与表型观察,进一步验证候选基因与弱畸形精子症的相关性。结果:我们在三个弱畸形精子症家系中发现患者均携带DNAH3双等位基因突变。HE染色和扫描电镜结果显示患者精子鞭毛呈现多种形态异常。透射电镜结果显示患者精子轴丝中央微管缺失,线粒体鞘和纤维鞘结构紊乱,内动力蛋白臂部分缺失。精子免疫荧光结果发现患者精子鞭毛终环和中心粒信号异常。Dnah3敲除雄鼠表现为雄性不育伴随精子尾部形态畸形和活力降低。结论:本研究发现DNAH3基因突变是该三个弱畸形精子症患者的致病原因,明确了DNAH3是导致人类和小鼠弱畸形精子症的新致病基因,为DNAH家族成员参与精子发生提供了新的证据。图20幅,表16个,参考文献80篇