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关键词： RDH12   小鼠模型   视网膜变性   点突变   临床特征  

摘要： 目的:归纳总结具有RDH12 c.146 C>T突变位点患者的临床特征,初步观察该位点突变小鼠的视网膜表型。方法:本研究基于一名31岁严重视网膜变性的男性患者,其主诉为夜盲症、视力下降、飞蚊症及一过性黑曚,眼底表现为黄斑区萎缩。应用芯片捕获高通量测序结合PCR验证的方法进行基因突变位点鉴定,并进行多模态眼底影像学检查及电生理检查。回顾具有相同突变位点患者的文章,并总结迄今为止已报道的18名同一突变位点患者的表型信息。在此基础上应用视网膜电生理、组织学、免疫荧光及光损伤模型等方法观察前期构建的Rdh12基因点突变小鼠的视网膜表型。结果:该视网膜变性患者基因检测结果为RDH12 c.146 C>T纯合突变,与之前报导过的18名相同位点突变患者表型相似,但在一些方面并不完全相同。特异点在于SLO显示双眼鼻侧视网膜动、静脉管径明显变细,颞侧血管中周部未见明显异常,周边部动、静脉明显变细;FAF显示黄斑区、视乳头鼻侧、视盘及黄斑水平连线呈对称性低荧光区域,视乳头颞侧呈月牙状高荧光区以及低荧光边界区的条索状高亮荧光;OCT表现出双眼黄斑区萎缩程度不一致及RPE层有向内延伸的异位。与野生型小鼠相比,Rdh12点突变小鼠视网膜OPL厚度降低(p<0.05),余各层厚度(包括ONL及IS+OS层)无统计学差异(p>0.05)。免疫荧光法鉴定Rdh12点突变小鼠视网膜RDH12蛋白仍有表达,与对照无明显差异。ERG暗适应和明适应的a波及b波振幅与野生型小鼠相比,均无明显统计学差异(p>0.05)。在强光持续刺激下Rdh12点突变小鼠ERG暗适应和明适应的a波及b波振幅与野生型小鼠相比并无明显统计学差异(p>0.05)。结论:本研究概述了一例RDH12 c.146 C>T纯合位点突变患者的视网膜表型特征,扩大了中国人RDH12相关视网膜变性表型谱,为该基因相关疾病的诊断及治疗提供了分子依据。同时对Rdh12点突变小鼠模型进行了初步的扩繁及表型观察,发现Rdh12点突变并不造成小鼠视网膜变性表型,Rdh12点突变小鼠可能并不对光损伤更敏感。

关键词： 多发性骨髓瘤   细胞遗传学异常   R2-ISS分期   预后   疗效  

摘要： 目的:根据mSMART3.0预后分层系统,探究不同细胞遗传学异常在初诊多发性骨髓瘤(Newly Diagnosed Multiple Myeloma,NDMM)患者中的分布情况、预后及疗效之间的相关性,并探索 2 次改良的国际分期系统(Second Revision of the International Staging System,R2-ISS)对多发性骨髓瘤(Multiple Myeloma,MM)患者的预后价值,为MM患者的预后评估及和优化治疗提供临床依据。方法:回顾性分析2013年9月—2022年4月在东南大学附属中大医院血液科住院的126例NDMM患者的临床资料。参照2018年mSMART3.0预后分层系统,定义高危、标危、“双打击”、“三打击”。按照欧洲骨髓瘤工作组的标准,设定阳性阈值。根据国际分期系统(International Staging System,ISS)、细胞遗传学、乳酸脱氢酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)水平将患者分为R2-ISS-Ⅰ至Ⅳ期,比较R2-ISS分期和不同高危细胞遗传学异常(High Risk Cytogenetic Abnormality,HRCA)及两者相结合的预后和疗效差异。采用SPSS Statistics 21,P<0.05为差异有统计学意义。结果:1.在126例患者中,涉及到的细胞遗传学异常包括:1q21扩增、del(13q)、t(4;14)、del(17p)、t(11;14)、t(14;16)、t(14;20)、TP53 突变,检出率分别为 59.5%(75/126)、54.0%(68/126)、21.4%(27/126)、12.7%(16/126)、10.3%(13/126)、1.6%(2/126)、0.8%(1/126)、0.8%(1/126);2.根据mSMART3.0,126例患者中,高危的有89例(70.6%)。其中,具有1种HRCA的有59例,占66.3%(59/89),“双打击”有27例,占30.3%(27/89),“三打击”有3例,占3.4%(3/89)。1q21扩增为最易出现的细胞遗传学异常,“双打击”中,最易出现的组合是 1q21 扩增伴 t(4;14),占 51.9%(14/27),其次是 del(17p)伴 1q21 扩增,占 25.9%(7/27);***升高(P=0.033)、R2-ISS-Ⅲ/Ⅳ期(P=0.025)是NDMM患者OS的独立预后危险因素;ISS-Ⅲ期(P=0.026)、1q21 扩增(P=0.006)、血清钙>2.65 mmol/L(P=0.005)是 PFS的独立预后危险因素;4.分析高危组与标危组患者的预后发现:(1)当白蛋白≥35g/L(30个月vs 18个月,P=0.019)或伴有溶骨性破坏(30个月vs 17个月,P=0.018)时,高危组患者的中位无进展生存期(Progression Free Survival,PFS)比标危组更短;(2)和标危组相比,只伴有1q21扩增1种HRCA患者的中位总生存期(Overall Survival,OS)(未达到vs 36个月,P=0.032)和中位PFS(33个月vs 10个月,P=0.048)更短;5.使用R2-ISS分期分析126例患者发现,Ⅰ期至Ⅳ期患者的中位OS(未达到vs未达到vs 43个月vs 22个月,P=0.000)和中位PFS(56个月vs 40个月vs 18个月vs 9个月,P=0.004)均有显著差异,且分期越高,中位OS和中位PFS越短;6.分析R2-ISS分期在不同因素下对OS的影响,发现患者合并存在血红蛋白<100g/L、血肌酐≤177μmol/L、血清钙≤2.65mmol/L、白蛋白≥35g/L、β2-微球蛋白(Beta2-Microglobulin,β2-MG)<5.5mg/L、伴有溶骨性破坏、不伴髓外浸润或在硼替佐米联合免疫调节剂(包括来那度胺、沙利度胺)为基础治疗、不含免疫调节剂以硼替佐米为基础治疗时,R2-ISS分期越高,中位OS越短;7.在标危患者中,R2-ISS-Ⅲ期患者的中位OS比Ⅱ期患者更短(30个月vs未达到,P=0.003);在高危患者中,具有1种HRCA时,R2-ISS-Ⅳ期患者的中位OS比Ⅲ期患者更短(26个月vs 54个月,P=0.039);“多重打击”患者只出现在R2-ISS Ⅲ期、Ⅳ期,且Ⅳ期患者的中位OS更短(52个月vs 18个月,P=0.01);8.疗效分析显示,含硼替佐米治疗组的完全缓解(Complete Response,CR)率(33.6%vs 0.0%,P=0.029)和总缓解率(Overall Response Rate,ORR)(61.9%vs 15.4%,P=0.00

关键词： 早期胚胎发育阻滞   基因突变   TLE6   KPNA7  

摘要： 不孕症是影响人类生殖健康的一个主要问题。现如今,许多不孕患者通过辅助生殖技术解决了生育难题。然而,临床上有部分患者经历了多次IVF/ICSI治疗周期的失败,这给他们带来了巨大的躯体和经济负担。早期胚胎发育阻滞是导致IVF/ICSI周期反复失败的主要原因之一。随着全外显子组测序技术的广泛应用,目前已发现了多个与人类早期胚胎发育阻滞相关的致病基因,但只能解释一小部分病例,仍有众多的早期胚胎发育阻滞患者的病因不明确。第一部分TLE6基因突变与早期胚胎发育阻滞目的:第一部分研究拟从IVF/ICSI周期中反复出现早期胚胎发育阻滞的患者中筛选出已知致病基因的新发突变位点。方法:招募以反复早期胚胎发育阻滞为特征的原发性不孕症女性患者,收集他们及其家系成员的外周血提取DNA,通过全外显子组测序和数据分析,比对已知的早期胚胎发育阻滞相关致病基因,筛选出已知致病基因的新发突变位点,并对候选突变进行Sanger测序验证。利用免疫荧光技术检测突变位点的表达与定位情况。结果:我们通过全外显子组测序在四名患者(来自三个独立家系)中发现了TLE6(transducin-like enhancer of split 6)基因三个新的突变位点c.1631＿1632del CA(***544Argfs*5),c.475＿476del CT(***159Aspfs*14)和 c.798＿799ins G(***267Alafs*54),以及一个先前已报道的突变位点c.222G>C(***74His)。这些双等位基因突变可导致早期胚胎发育阻滞和女性不孕。免疫荧光结果显示TLE6基因纯合移码突变c.1631＿1632del CA显著降低了患者卵母细胞中TLE6蛋白的含量。结论:我们的研究扩大了TLE6基因的突变谱和表型谱,进一步证明了TLE6在人类早期胚胎发育中的重要作用。第二部分KPNA7基因突变与早期胚胎发育阻滞目的:第二部分研究拟从已知致病基因无法解释的反复早期胚胎发育阻滞的患者中筛选出新的致病基因。方法:招募以反复早期胚胎发育阻滞为特征的原发性不孕症女性患者,收集他们及其家系成员的外周血提取DNA,进行全外显子组测序,在已知的致病基因无法解释的病例中,着眼于有害的、罕见的且在卵巢中高表达或特异性表达的基因,以期发现新的致病基因。对候选突变进行Sanger测序验证。通过表达载体构建、质粒转染、蛋白质印迹等技术在293T细胞中研究候选基因突变产生的影响。结果:通过全外显子组测序,我们从一个非近亲家系中发现了KPNA7(karyopherin subunit alpha 7)基因纯合突变c.314＿315ins C(***106Serfs*6)。本研究发现的变异c.314＿315ins C是首次报道的KPNA7在人类早期胚胎发育阻滞中的突变。根据ACMG指南,该突变被判断为疑似致病变异。KPNA7是输入蛋白α家族的成员之一,负责运输与早期胚胎发育相关的关键核蛋白。蛋白质印迹结果显示,与野生型相比,KPNA7基因突变导致截短蛋白的产生。由此推测该突变可能损害了其作为核转运蛋白的功能,从而导致早期胚胎发育阻滞。结论:我们的研究发现了KPNA7基因纯合突变c.314＿315ins C与早期胚胎发育阻滞有关,这有助于我们理解KPNA7在人类早期胚胎发育中的作用,并为女性不孕症提供一个新的遗传标记。

关键词： 急性早幼粒细胞白血病   插入易位   复杂变异易位   荧光原位杂交   转录组测序  

摘要： 目的:探讨两例不典型t（15;17）急性早幼粒细胞白血病（acute promyelocytic leukemia,APL）患者的细胞遗传学和分子遗传学特点,并复习文献。方法:收集两例患者的病史资料、血常规、凝血功能、骨髓细胞形态学、骨髓免疫分型等临床资料,并进行染色体核型分析、荧光原位杂交（FISH）检测、逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测PML-RARα融合基因并对扩增产物进行Sanger测序,对病例1进行白血病常见突变基因检测,对病例2进行转录组测序分析。总结分析国内外已报道的急性早幼粒细胞白血病ins（17;15）插入易位病例27例和复杂变异易位病例53例患者的临床资料。结果:两例患者均以出血为主要临床表现,骨髓细胞形态学和骨髓免疫分型表现为典型的APL特点。病例1染色体核型分析结果为48,XY,+8,+mar,未发现t（15;17）;间期FISH结果提示2红1绿1黄非典型信号特征,中期FISH结果提示黄色融合信号位于17号染色体上,染色体核型为48,XY,+8,+mar,ins（17;15）（q21;q21q22）;RTPCR和Sanger测序显示PML-RARα融合基因阳性,转录本类型为S型;白血病常见基因检测提示低频率的FIT3-ITD突变。病例2染色体核型分析结果为45,XX,der（9）t（9;22）（p22;q13）,t（15;22;17）（q22;q13;q21）,-22;FISH结果提示2红2绿1黄非典型信号特征,RTPCR和Sanger测序显示PML-RARα融合基因阳性,转录本类型为L型;转录组测序和分析发现患者携带PML-RARα融合基因和RARα-SYN3融合基因。两例患者均经全反式维甲酸（ATRA）和三氧化二砷（ATO）联合方案诱导治疗后达完全缓解（CR）,病例1进行了3个疗程的IA方案（去甲氧柔红霉素（IDA）+阿糖胞苷（Ara-C））巩固治疗,此后进行ATRA和ATO交替的维持治疗;病例2进行了ATRA+ATO的巩固治疗,此后进入ATRA和ATO交替的维持治疗。随访至2022年3月,两例患者均处于持续缓解状态。隐匿型ins（17;15）APL患者对ATRA和ATO联合诱导治疗具有明显疗效;ins（17;15）APL患者的转录本类型的比例与典型易位患者的比例接近;ins（17;15）APL患者合并附加染色体异常比例增高,但对其预后并无影响。复杂变异易位APL男女比例为1.1:1,中位年龄44.5岁（10岁-78岁）,同典型易位APL患者的年龄及性别特征无明显差别;复杂变异易位APL患者PMLRARα融合基因L型转录本比例较高,低危组所占比例偏多;APL的复杂变异易位可累及除14号染色体和Y染色体外的所有染色体,1p36、2q21、3p21、4q21、6p21、11q13、19p13、20p13、22q11.2、Xq13断裂点反复出现,均被报道至少2次。结论:1、ins（17;15）插入易位的APL,临床上较为少见,当染色体正常,而PMLRARα融合基因阳性时,应当选用覆盖范围相对较大的FISH探针进行间期FISH检测,并联合中期FISH验证易位结果。2、对于复杂变异易位的APL,FISH检测和转录组测序有助于推测复杂易位的染色体易位机制。3、ins（17;15）插入易位APL和复杂变异易位APL,均存在PML-RARα融合基因,对ATRA和ATO治疗反应良好,预后较好。

关键词： 中华草龟   中华花龟   RAD-seq   微卫星   COX1   Cytb   群体遗传   遗传多样性  

摘要： 中华草龟(Mauremys reevesii)和中华花龟(Mauremys sinensis)是中国非常重要的两种经济淡水龟,然而受过度捕捞、栖息地丢失与碎片化等人类活动影响,正面临着遗传多样性丢失,野外资源枯竭的严峻现状,已被收录进世界自然保护联盟红名目录。然而,未经审查的亲本引入和近亲繁殖使得群体遗传背景模糊,遗传多样性流失。先前的中华草龟和中华花龟的群体遗传研究受限于分子标记种类与数量的限制,不能充分了解其遗传多样性和群体结构。在本研究中,基于简化基因组(RAD-seq)开发的5688个全基因组范围内SNP标记和线粒体CO1-Cytb基因串联序列,对中华草龟(安徽、广东和湖北)和中华花龟(台湾)群体的遗传多样性和群体结构进行了解析。主要研究结果如下:基于SNP标记的分析表明4个群体遗传多样性仍较为丰富,但可能是种间杂交和回交产生的假象,群体间缺乏遗传分化,人为活动引起的基因流动可能是促使群体间缺乏遗传结构的主要原因;基于线粒体CO1-Cytb基因的串联序列分析表明4个群体在经历了群体扩张后仍保留较高的遗传多样性,除广东群体外,其他群体间因较高的基因流导致遗传分化轻微;基于RAD-seq文库成功筛选并表征了12个具有多态性的微卫星位点,有效等位基因数量为5.67～9.20,观测杂合度范围为0.1～0.65,PIC范围为0.83～0.92,所有位点除MM8外均偏离哈迪-温布格定律。本研究可以为中华草龟和中华花龟的群体遗传学研究和种质资源开发与恢复提供遗传数据支持。

关键词： 胚胎植入前遗传学筛查(PGT)   二代测序技术(NGS)   非整倍体   女性年龄   黏附素复合体  

摘要： 目的:1.回顾性分析行胚胎植入前遗传学检测(Preimplantation Genetic Testing,PGT)患者的胚胎染色体检测结果,比较不同PGT指征、不同年龄段女性患者胚胎染色体非整倍体发生的差异,探讨不同指征、年龄与胚胎非整倍体发生的关系,明确PGT胚胎非整倍体发生的情况及其影响因素。2.以小鼠为研究模型,检测育龄和高龄小鼠卵巢中黏附素复合体(Cohesin)表达情况,从分子水平上探讨年龄相关胚胎非整倍体发生与卵巢黏附素表达之间的关系。方法:1.收集2016年4月至2021年4月在我院生殖中心行PGT助孕患者的胚胎活检染色体检测结果和临床资料,共有322个取卵周期。根据不同指征分染色体相互易位携带者组、染色体罗氏易位携带者组、染色体倒位携带者组、双亲衍生染色体异常、地中海贫血携带者、不良孕产史组及复发性流产(Recurrent Spontaneous Abortion,RSA)/反复种植失败(Repeated Implant Failures,RIF)组,其中不良孕产史组和RSA/RIF组为排除双亲染色体异常携带者;女性年龄段分低龄组(<35岁)和高龄组(≥35岁)。分析胚胎染色体检测结果,分为整倍体和非整倍体,其中非整倍体又分为染色体非整倍体、片段非整倍体、嵌合体和复杂性非整倍体。比较不同PGT指征和不同年龄段女性患者胚胎染色体非整倍体发生率及不同非整倍体类型的分布情况。2.实验研究对象为ICR品系育龄小鼠(4-6w)和高龄小鼠(10-13w)各5只,分为育龄组和高龄组,每组随机选取3只小鼠并做标记,每日同一时间进行阴道涂片,连续21天动情周期观察。周期观察结束后,水合氯醛麻醉两组小鼠,解剖后分离获得卵巢组织,采用免疫组织化学、蛋白印迹法(Wester blot)、Real time PCR法检测两组小鼠卵巢中黏附素复合体蛋白、m RNA的含量,比较不同年龄组小鼠卵巢组织中黏附素复合体的表达情况。结果:1.总共对1020个胚胎进行了活检,有效检测到的胚胎数量为1019个。整倍体胚胎数目为495个(48.58%),非整倍体胚胎数目为524个(51.42%)。非整倍体中片段非整倍体胚胎数目为330个(62.98%),染色体非整倍体为146个(27.86%),嵌合体为4个(0.76%),复杂性非整倍体为44个(8.40%)。染色体非整倍体中亚二倍体胚胎数目为73个(48.67%),假二倍体为13个(8.67%),三倍体为52个(34.67%),多倍体为8个(5.33%)。在染色体异常的胚胎中以异常染色体数目为1条(76.26%)最为常见。2.在不同PGT指征中,染色体相互易位、罗氏易位携带者及不良孕产史患者产生的非整倍体胚胎数目分别为315个(62.62%)、54个(50.00%)和29个(50.00%);RSA/RIF、倒位携带者、衍生染色体及地中海贫血携带者患者产生的非整倍体胚胎数目分别为28个(39.44%)、30个(27.78%)、20个(43.48%)和48个(38.40%);不同PGT指征的患者胚胎整倍体率与非整倍体率比较具有统计学差异(χ2=23.94,P<0.05)。3.比较不同PGT指征的非整倍体类型发生情况,RSA/RIF、染色体罗氏易位携带者及双亲衍生染色体异常组中,以染色体非整倍体为主,分别为17个(60.71%)、28个(51.85%)、12个(60.00%);不良孕产史、地中海贫血携带者、染色体倒位、相互易位携带者组中以片段非整倍体为主,分别为14个(48.28%)、31个(64.58%)、16个(53.34%)、231个(73.33%)。4.染色体分析结果显示,16、21和22号染色体在胚胎染色体非整倍体发生中较多见,分别占11.19%、11.94%和10.82%。高龄组1、2、3、4、5、7、8、17、19、Y号染色体上未见染色体非整倍体发生,而多发生于16、18、21、22号染色体;低龄组多见于16、21号染色体。5.对女性年龄因素分析发现:高龄组中胚胎染色体非整倍体发生率显著高于低龄组(41.42%VS 25.77%,P<0.05);而片段非整倍体发生率低于低龄组,差异有统计学意义(42.86%VS 66.08%,P<0.05);高龄组胚胎总的非整倍体发生率为57.85%,与低龄组发生率50.56%相比,差异无统计学意义(P≥0.05)。6.动物实验结果显示,育龄组小鼠呈现规律动情周期变化,而高龄组表现为动情周期紊乱或周期消失。高龄组小鼠卵巢组织中黏附素复合体的表达水平显著低于育龄组,差异有统计学意义(P<0.001)。结论:1.在不同PGT指征中,染色体相互易位携带者、罗氏易位携带者、不良孕产史患者可能更易导致胚胎染色体非整倍体的发生。2.胚胎染色体异常中以1条染色体数目异常最为

关键词： 表观遗传学   高中生物学   事实与概念   印记区域  

摘要： 表观遗传学的高热度研究是伴随分子遗传学等领域发展的一场“新革命”，有关内容已纳入高中生物学课程。通过分析表观遗传修饰的写入、维持、遗传、擦除等过程，初探细胞分化的实质原因、细胞全能性的抑制与激发机理、部分表观现象产生的原因和生物进化理论比较等内容。利用表观遗传学取得的成果，对高中生物学中关于分化、遗传、变异、进化及生物技术等一些事实与概念进行重新审视和释疑。

关键词： 影像遗传学数据   多任务学习框架   特征选择  

摘要： 近年来，影像遗传学作为连接神经影像学和分子基因学的桥梁为人类全面了解基因对脑结构和功能的影响带来了可能，进而揭示神经疾病的致病机制。稀疏典型相关分析和多模态分析在影像遗传学中得到了广泛的应用。但是它们也面临一些挑战，如稀疏典型相关分析是一种无监督学习方法，它忽略了与疾病相关的诊断信息，而且传统的多模态分析无法区分与基因型差异相关的不同神经影像学的一致性和特异性信息。　　本文提出了两种改进式多任务稀疏典型相关分析方法解决影像遗传学数据关联问题，主要工作和创新如下：　　（1）为了解决典型相关分析无监督学习导致学习效率低的问题，本文提出了一种基于模态一致性和模态特异性的引导式典型相关分析特征选择算法。该算法利用样本标签这一先验知识对典型相关学习模型进行引导，与此同时为了得到更加精细的多模态之间的关联和区别，该算法将多模态权重分解为模态共享权重和模态特异权重，并利用多任务学习框架帮助多模态学习，从而选出更具有判别力的特征。实验证明，提出的方法无论在相关性还是特征选择上都具有很强说服力。　　（2）为了改善权重分解产生三个高维权重矩阵导致计算复杂的问题，本文提出了一种基于快速算法影像遗传学的关联特征选择算法。该算法利用单核苷酸多态性群体结构对单核苷酸多态性进行分组，并将分组后的单核苷酸多态性作为一个整体进行特征选择，与此同时在算法优化上使用块对角矩阵加速计算。实验证明，提出的方法作为基于模态一致性和模态特异性的引导性典型相关分析特征选择算法的改进算法，在选出相关特征和几乎未改变原始算法得到的相关性基础上完成了模型的加速。　　本文使用两种数据集评估算法的有效性，其中包括来自阿尔茨海默病神经影像学倡议的真实神经影像遗传学数据和模拟数据。实验结果表明，本文提出的算法可以获得比现有最先进方法更好的性能。

关键词： 青少年起病成人型糖尿病   HNF1α   HNF1β   KLF11   临床特征   遗传研究  

摘要： 目的:青少年起病成人型糖尿病(Maturity-onset Diabetes of the Young,MODY)是常染色体显性遗传并由单基因突变导致的特殊类型糖尿病。临床上MODY起病隐匿,误诊率高。本研究对三个拟诊为MODY家系的临床及遗传学特征进行分析,并对发现的新突变进行功能验证,以拓宽MODY致病基因谱,为MODY的精准治疗提供依据。方法:收集2019年-2021年于中南大学湘雅三医院内分泌科就诊的三个高度怀疑为MODY家系的临床资料。留取各家系成员外周静脉血,提取基因组DNA,采用全外显子组测序(whole exon sequencing,WES)筛选出可能与MODY相关的基因突变并进行Sanger测序和家系验证。进一步通过实时PCR、蛋白印记、荧光素酶试验以及葡萄糖刺激胰岛素分泌实验对其中筛选出的一个KLF11新发突变探索其在MODY的致病机制。结果:1、先证者1,22岁男性,糖尿病病程半年,具有连续2代并符合常染色体遗传规律的糖尿病家族史。基因检测及家系验证发现该家系携带与MODY3相关的HNF1αc.874dup A(p.G292Rfs*25)插入移码突变,该突变使HNF1α基因的第874位碱基重复插入腺嘌呤,导致292位氨基酸残基由甘氨酸变精氨酸并发生氨基酸移码,造成编码的蛋白肽链转录提前终止。HNF1αp.G292Rfs*25为已知的致病突变。2、先证者2,24岁女性,初诊糖尿病患者,伴有多囊肾、胰腺发育不良,鞍状子宫等多器官发育畸形。其父亲及姐姐均在25岁之前确诊糖尿病。基因检测及家系验证发现该家系携带与MODY5有关的HNF1βc.826C>T(p.R276*)杂合无义突变,该突变导致276位氨基酸由精氨酸变为终止密码子,使编码的蛋白转录提前终止。HNF1βp.R276*突变既往在日本人群有报道,在中国人群为首次报道。3、先证者3,45岁男性,32岁确诊为糖尿病,具有连续4代并符合常染色体遗传的糖尿病家族史。基因检测及家系验证发现该家系携带与MODY7相关的KLF11 c.577C>A(***193Thr)杂合错义突变,该突变导致193位氨基酸残基由脯氨酸变为苏氨酸,该突变在HGDM数据库未见报道。体外细胞功能试验证实KLF11新发突变不影响KLF11的m RNA及蛋白的表达,但可导致KLF11转录调控胰岛素基因的活性下降,同时在高糖刺激下胰岛素合成和分泌减少,认为该新发突变可导致MODY的发生。结论:我们在三个早发糖尿病家系中发现了与MODY3、MODY5、MODY7相关的基因突变(HNF1αp.G292Rfs*25、HNF1βp.R276*和KLF11 p.P193T)。其中新发突变KLF11 p.P193T抑制了胰岛素基因启动子的表达,导致KLF11转录调控胰岛素基因的活性下降,造成胰岛素分泌减少,本研究拓展了MODY的表型和致病突变谱。图10幅,表6个,参考文献62篇

关键词： 孤立种群   黔金丝猴   遗传多样性   线粒体DNA控制区   微卫星序列  

摘要： 黔金丝猴（Rhinopithecus brelichi）自1903年被首次发现以来,经多次调查证实当前种群仅存在于在梵净山国家级自然保护区内,长期生存在被隔离的孤立条件下,是典型的局域小种群。中国分布的四种金丝猴中,黔金丝猴种群规模最小,群体增长缓慢,种群恢复潜力最低,灭绝风险更高,IUCN把其评为极危灵长类动物,目前关于黔金丝猴的种群遗传学研究较少。为能进一步了解该物种,通过非损伤性样品取样,基于微卫星分子标记、性别鉴定基因和mt DNA D–loop区序列扩增实验,揭示其遗传学背景,目前种群的遗传多样性,为这一孤立小种群长期的生存发展,保护与复壮提供理论基础科学依据。本研究共采集黔金丝猴粪便样品312份,成功扩增288条序列,全长866bp,基于线粒体控制区分子标记,检测黔金丝猴种群遗传多样性及遗传结构发现:单倍型11个,32个变异位点,其中转换28个,颠换4个。单倍型多样性（h）0.517,核苷酸多样性（π）0.00413。中性检验不显著种群动态分析显示种群近期未发生扩张,贝叶斯天际线（BSP）结果显示黔金丝猴在25000年前种群开始下降。黔金丝猴种群的遗传多样性水平低于川金丝猴和滇金丝猴。筛选出11个具有多态性的微卫星位点结合性别鉴定基因,识别出179个个体,雌性92只,雄性63只,性别比例雄雌比1:1.46。11对引物在179个个体中共检测到55个等位基因,种群平均多态信息含量（PIC）为0.562,平均观测杂合度（Ho）,平均期望杂合度（He）分别为0.71、0.62,遗传多样性水平低于川金丝猴,和滇金丝猴相比无显著差异;通过杂合度显著过剩分析及等位基因频率分布分析,结果为种群没有显著的杂合子过剩,基因频率分布为正常“L”型,表明种群近期未经历遗传瓶颈;种群遗传结构结果种群未为发生遗传分化,目前黔金丝猴只有一个大群,无亚种群分化,有效种群规模计算估算出当前有效种群规模（Ne）为675±292。黔金丝猴作为一个孤立的小种群,种群在过去经历了衰退,在近十年种群数量没有显著增加,可能是由于当前栖息地已达到环境容纳量。