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摘要： 孕妇38岁, 孕18 w, 生育一胎男孩, 10岁, 健康, 其后流产7次, 自述12号染色体异常, 无法提供相应染色体核型报告;丈夫39岁, 自述染色体正常;男孩未查染色体。鉴于上述病史, 建议进行产前诊断、羊水细胞培养、染色体核型分析。本研究符合《世界医学会赫尔辛基宣言》。

关键词： 动物遗传学  

ISBN: (纸本)9787565527838

摘要： 本书系统介绍了动物遗传学的基本概念、基本理论和基本方法, 包括溃传的细胞与分子学基础、遗传信息的传递、遗传的基本定律、遗传物质的变异、非孟德尔遗传、群体遗传学基础、数量遗传学基础、动物基因组学基础、动物基因工程等。

关键词： 群体遗传学   加速进化区   自然选择   全基因组扫描   社会等级  

摘要： 哺乳动物作为目前最成功的陆生生物之一，其进化的各个阶段出现了许多特有的性状。然而，这些性状背后的进化和遗传机制大多尚不清楚。我们运用多种检测自然选择的方法对胎盘哺乳动物、人类和现代人的不同群体进行了全基因组扫描，寻找受选择位点，并探究其与特有性状之间的关系。　　在动物社会性进化过程中，社会等级伴随社会系统出现，能够影响个体的行为方式和健康状况。然而，羊膜动物的社会等级的进化机制尚不清楚。我们开发了一种基于全基因组扫描以寻找特定时期加速进化区的方法和相应的软件Kung-Fu Panda(KFP)。胎盘哺乳动物祖先形成阶段实现了从独居向社会性生活的演变。使用KFP检测这一时期常染色体序列的变化发现加速进化最显著的区域可能和这一演变有关，将其定义为Placental-accelerated sequence1(PAS1，P=3.15×10-18)。多项证据显示PAS1作为Lhx2基因的一个增强子参与大脑发育过程。来源于不同羊膜动物的PAS1等位基因在体外实验中表现出不同的调控活性，也造成Lhx2在小鼠胚胎期神经系统中表达模式的差异。PAS1敲除小鼠缺乏社会分层。沙袋鼠和鸡的PAS1等位基因敲入小鼠模型表明，PAS1能够决定成年小鼠在社会中的支配-从属地位，并且改变PAS1可以实现社会等级的反转。所有的突变型小鼠都具有正常的抱团睡觉行为、运动能力和力量。因此，PAS1通过调控Lhx2表达来影响社会等级并且对于羊膜动物建立层次良好的社会系统至关重要。胎盘哺乳动物形成时期，自然选择在PAS1的进化过程中起到了关键作用。　　尿囊绒毛膜胎盘是胎盘哺乳动物特有的一个器官，也是其最重要分类学特征。然而，其起源及经历的适应性进化等问题仍没有答案。我们检测了胎盘哺乳动物起源时期X染色体上发生的加速进化事件，共发现了8个胎盘哺乳动物加速进化区。其中5个位于Nik-related kinase(Nrk)基因的外显子内。Nrk属于生发中心激酶Ⅳ（germinal center kinaseⅣ，GCK-Ⅳ）亚家族，在胎盘发育和胎儿胎盘诱导分娩的过程中发挥重要功能。此外，胎盘哺乳动物Nrk产生了一个新外显子。通过同源建模的方法构建了NRK蛋白催化域的3D结构模型，推测加速进化的外显子和胎盘哺乳动物特有外显子（形成高灵活性的环状结构）能够通过改变活性位点构象来影响催化活性。因为新外显子高度保守但其上下游外显子拥有众多氨基酸替换，我们推测新产生的环状结构改变了NRK的催化功能，之后为了适应这种改变其周围的其他外显子发生加速进化。我们的这项工作提供了一种自然选择驱动尿囊绒毛膜胎盘形成和胎儿胎盘诱导分娩机制改变的假说。　　关于人类加速进化区的研究表明神经系统相关基因受到较多的自然选择，但加速进化如何影响人类神经系统尚不清楚。关于免疫系统基因加速进化的研究匮乏。我们运用改进后的KFP软件扫描了人类33.91％的基因组，相较其他研究覆盖度大幅提高，发现检测出的人类加速进化区（HARs）主要和大脑的突触形成相关。80％以上的HARs与功能元件重叠，并且编码区出现加速进化的概率显著高于其他区域，表明此前研究低估了编码区发生加速进化的概率。对KFP软件功能进行拓展，使其能够以功能元件为单位进行分析。对编码区和启动子、增强子区域的分析表明，编码区和增强子的加速进化区对应的基因主要富集到免疫功能。我们的这项工作系统的描绘了加速进化对人类性状的影响并提供了相应的候选基因。　　较大的脑容量是现代人标志性特征。小脑增大是脑容量扩张的主要因素，但其增大的进化机制尚不清楚。NBPF家族与脑容量相关，但其受选择模式缺乏研究。我们开发了基于溯祖理论的检测正选择的新方法，并对分别来自欧洲、亚洲、非洲的三个群体进行了全基因组扫描。在三个群体中都检测到了NBPF19、NBPF20和NBPF26三个同家族基因的选择信号。其中NBPF19和NBPF20信号恰好涵盖人类特有的Olduvai三元组扩张区域，推测这种大量复制事件是受选择因素。NBPF26附近的选择信号包含其下游的一个CpG岛，表观遗传学分析表明该位置具有增强子活性。和黑猩猩序列比较发现，人类该段序列新获得了多个TFBS。其中，SP5和NBPF26表达模式相同，可能通过该增强子调控NBPF26表达。而且，NBPF19、NBPF20和NBPF26在小脑中的表达量高于其他脑组织。我们的这项工作将NBPF家族的自然选择、小脑增大、现代人脑容量扩张联系起来。

关键词： 长链非编码RNA   非小细胞肺癌   EGFR  

摘要： 目的:非小细胞肺癌(NSCLC)经表观遗传学治疗后分析筛选出差异性表达的LncRNA XLOC＿012366,通过体外实验探讨其对NSCLC细胞增值、迁移侵袭、凋亡的影响,进一步观察其对EGFR-PI3K/AKT通路的影响。方法:***-PCR检测实验肺癌组织和肺癌细胞转染LncRNA XLOC＿012366的表达水平以及EGFR的表达水平。*** counting kit 8(CCK-8)、Ed U、克隆形成实验检测转染后各组细胞增殖生长能力。4.细胞划痕实验检测转染后各组细胞的迁移作用。***检测转染后各组细胞侵袭和转移能力。***实验、流式细胞仪检测转染后各组细胞的凋亡。*** blot实验检测转染后肺癌细胞中EGFR-PI3K/AKT通路中关键的相关蛋白表达。结果:***-PCR实验结果表明LncRNA XLOC＿012366在肺癌组织及细胞中表达上调。***-8实验检测发现干扰LncRNA XLOC＿012366组肺癌细胞增殖速度明显减慢(A549组P<0.001,H838组P<0.001)。*** U实验表明干扰LncRNA XLOC＿012366组肺癌细胞增殖数目最少(A549组P<0.01,H838组P<0.0001)。4.克隆形成实验表明干扰LncRNA XLOC＿012366组肺癌细胞生长能力显著减弱(A549组P<0.0001,H838组P<0.001)。5.细胞划痕实验观察到干扰LncRNA XLOC＿012366组细胞迁移能力最不明显(A549组P<0.0001,H838组P<0.001)。***检测干扰LncRNA XLOC＿012366组细胞侵袭与转移能力显著减弱(A549组P<0.05,H838组P<0.001)。***实验结果显示:与对照组相比,干扰LncRNA XLOC＿012366组细胞凋亡数量显著增高(A549组P<0.01;H838组有明显差异,P<0.01)。8.流式细胞仪检测结果显示:干扰LncRNA XLOC＿012366组细胞凋亡的百分比增高(A549组P<0.0001,H838组P<0.0001)。***-PCR检测结果表明干扰LncRNA XLOC＿012366组的EGFR表达量减低(A549组P<0.0001,H838组P<0.01)。*** blot检测结果显示:肺癌细胞转染干扰LncRNA XLOC＿012366组中,EGFR-PI3K/AKT通路相关蛋白表达水平显著降低。***与LncRNA XLOC＿012366呈正相关。结论:经表观遗传治疗筛选的LncRNA XLOC＿012366,干扰其表达抑制非小细胞肺癌转移。另一方面LncRNA XLOC＿012366还通过调控EGFR-PI3K/AKT通路抑制肿瘤细胞生长,介导肺癌转移抑制。

关键词： 急性淋巴细胞白血病   分子遗传学   造血干细胞移植   微小残留病灶  

摘要： 目的:青少年和成人急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)的预后较差,复发是导致患者死亡的重要原因。遗传信息的改变在ALL的发病及复发进程中具有重要作用,微小残留病灶(minimal residual disease,MRD)水平也被证实与ALL患者的复发有着密切关系,但是关于分子遗传学的改变对于疾病诊断和预后的影响目前并没有一致结论,MRD水平对于患者的治疗的指导意义也并不明确。本研究旨在通过多中心回顾性分析探讨年龄≥15岁的青少年和成人ALL患者的基因突变频谱及与MRD、造血干细胞移植(hematopoietic stem cell transplantation,HSCT)等相结合时的预后意义,从而进一步完善ALL患者的风险分层,指导治疗决策。方法:收集2014年1月1日至2021年12月20日期间,于山东省立医院、烟台毓璜顶医院和青岛大学附属医院初次确诊的年龄≥15岁的404例ALL患者的基本特征、细胞遗传学、分子遗传学、MRD、治疗方案及生存结局等信息,利用SPSS25及R软件进行相关性分析和生存分析。结果:第一部分:共纳入有二代测序结果的147名ALL患者,其中91.20%至少发生了一种突变,67.35%的患者存在多基因(≥2)突变。T-ALL以NOTCH1(8/21,38.10%),PHF6(7/21,33.33%),RUNX1(4/21,19.05%),PTEN(4/21,19.05%),JAK3(3/21,14.29%),TET2(3/21,14.29%),JAK1(3/21,14.29%),SPEN(2/21,9.52%)等突变最为常见,而B-ALL 则以 FAT1(19/123,15.45%),TET2(18/123,14.63%),NARS(17/123,13.82%),KMT2D(17/123,13.82%),FLT3(16/123,13.01%),RELN(13/123,10.57%),ASXL1(9/123,7.31%)等突变最为常见。相关性分析发现了经常共同出现的突变模式,在T-ALL和B-ALL中有显著区别。随后对107例有完整生存数据的B-ALL患者的预后影响因素进行了分析,包括性别、年龄、白细胞计数、费城(Ph)染色体状态、是否行HSCT、乙肝病毒感染状态、诱导化疗后MRD水平、诱导化疗骨髓缓解状态以及突变频数≥6的基因等因素。单因素分析结果表明,FLT3 突变(P=0.033),RELN 突变(P=0.055),TP53 突变(P=0.075)和复发(P=0.033)是B-ALL患者总生存期(overall survival,OS)的不良影响因素,而进行HSCT(P=0.001)、诱导治疗后MRD阴性(P=0.004)的患者具有更好的OS。多因素分析显示,1 次化疗后 MRD(minimal residual disease after one course of chemotherapy,MRD1)≥1%(P=0.004)、TP53 突变(P=0.010)和 RELN 突变(P=0.045)是 OS 的独立危险因素。而NOTCH1突变(P=0.015)和复发(P=0.000)则是无事件生存期(event-free survival,EFS)的独立危险因素。第二部分:我们研究了化疗后MRD水平对B-ALL患者预后的影响,以及不同的MRD1水平对于患者缓解后治疗(post-remission therapy,PRT)选择的指导意义。该部分共纳入195例有MRD数据的ALL患者,对B-ALL患者进行预后分析,单因素分析结果表明,1 次诱导化疗后达到 CR(complete remission in the first time,CR1),MRD1<0.01%,2 次化疗后 MRD(minimal residual disease after two courses of chemotherapy,MRD2)<0.01%,3 次化疗后 MRD(minimal residual disease after three courses of chemotherapy,MRD3)<0.01%,非遗传学分层为标危的患者以及干细胞移植(stem cell transplantation,SCT)组患者都具有更好的OS和无病生存期(disease-free survival,DFS),另外年龄>35岁的患者有更差的OS(P=0.024)。而在多因素分析中都只有MRD3是否<0.01%以及PRT的方式(P=0.021),即化疗或者移植是OS和DFS的独立预后影响因素。MRD2≥0.01%(P=0.036)和分组为化疗(chemotherapy,CMT)组(P=0

关键词： 虎鲸   种内分化   群体遗传学   种群结构  

摘要： 虎鲸（Orcinus orca）作为分布极广、横跨南极到北极的全球分布性物种，在长期的进化中形成了多种生态型。已确定的生态型分型达到了10种：东北太平洋的过客型（Transient）、居留型（Resident）和远洋型（Offshore）虎鲸;北大西洋的1型（Type1）和2型（Type2）虎鲸;南大洋海域的A型（AntA）、B型（AntB1和AntB2）、C型（AntC）和D型（AntD）虎鲸。即使在同域生态型间，也存在形态、叫声、栖息地、饮食习惯和社会结构等方面的差异。多个种内生态型的存在，这使得虎鲸成为探讨“海洋物种形成悖论”的良好对象。根据“海洋物种形成悖论”，在海洋环境下缺少地理隔离的条件下，一般认为由于较高基因流的存在使得难以形成多样化的海洋物种，但这与实际情况并不一致。此外，虎鲸种内分化和一些特殊生态型的分类地位问题，仍未得到很好的解决。因此，本研究拟基于线粒体基因组，运用群体遗传学和分子进化方法，分析虎鲸不同生态型的种群结构和受选择情况，进一步探讨了虎鲸的种内分化及不同生态型的分类地位问题。　　本研究分析了来自 8种虎鲸生态型（太平洋的 Offshore、Resident和Transiet;南大洋的AntA、AntB1和AntB2、AntC;大西洋的Type1）的77条全线粒体基因组序列，构建了线粒体13个蛋白质编码基因的串联基因（序列长度为11370bp）数据集，并进行系统发育、群体遗传学和分子进化分析。获得了以下结果：　　1.系统发育分析表明，8种生态型聚为3个类群：首先北太平洋的Offshore和 Resident与大西洋的 Type1聚为一支，再与南大洋的 4种生态型（ AntA、AntB1、AntB2和AntC ）形成姊妹类群，最后与北太平洋的Transient构成姊妹类群。STRUCTURE分析、主坐标分析（PCoA）和单倍型网络图（Haplotype network）均支持系统发育的分析结果，即把虎鲸分为3个类群。　　2.77条线粒体串联序列共定义了57个单倍型，总单倍型多样性为0.985，总核苷酸多样性为 0.00303。虎鲸的各个生态型的单倍型多样性（0.81818-1.00000）和核苷酸多样性（0.00729–0.06366）都较高，说明生态型内遗传多样性较高。除了 AntC外，其余生态型的中性检测Tajima''s D和Fu''s Fs都为负值。生态型Resident和Type1的D值统计检验显著，Offshore和Resident的Fs值检验分别为显著和极显著水平。但这三个生态型的核苷酸错配分布并未呈现单峰分布，即不能证明有群体扩张事件的发生。　　3.生态型间的种群遗传分化系数Fst在0.47326-0.91966之间，表明生态型间具有高水平的遗传分化。AntB和AntC间的Fst值最小（ 0.47326 ）， AntB和Residentd之间的Fst值最大（0.91966），均具有高水平的遗传分化。Transient与其他生态型间的Fst值的平均值最大（ 0.89627 ），表明Transient与其他生态型的遗传分化极大。AMOVA分析进一步证实生态型间的分化主要来源于生态型间，这表明不同生态型间的分化水平大于生态型内的分化水平。　　4.进化分析表明，虎鲸线粒体编码基因普遍受到纯化选择，但ND3基因的89号位点在Transient支系中特异性地受到正选择作用。通过三维结构及蛋白质突变模拟，表明ND3的正选择位点L89P位于跨膜功能域，这一突变改变了氨基酸残基大小和性质，从而影响该蛋白质活性，可能是生态型Transient适应其独特生活方式的进化结果。　　本研究通过线粒体基因组进行的系统发育、群体遗传学和分子进化分析，为虎鲸种内分化情况提供了新的遗传证据，并建议将生态型Transient虎鲸的分类地位调整为种。

关键词： 阿尔茨海默病   分子动力学模拟   免疫共沉淀实验   TGM4   USP10   脑网络   海马亚区  

摘要： 目的阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是最常见的痴呆形式,其特征是神经元萎缩、记忆丧失和认知障碍以及协调能力和独立生活能力的逐渐恶化。本项目利用阿尔茨海默病神经影像学计划(Alzheimer’s disease Neuroimaging Initiative,ADNI)数据库中丰富的脑影像、遗传和临床等数据,将开展基于影像特征下的遗传关联分析的研究,结合计算方法(如分子对接,分子动力学模拟和易感基因影像特征的统计检验方法)以及生物实验方法(如免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP))等方法验证发现的易感基因对AD相关功能改变的作用机制,以期为探索AD生物学机制提供线索,从而更好理解AD的发病特征以及开发对应靶向药物并提供个性化治疗,同时也能为神经学家探索其他神经疾病机制提供新的视角。方法从ADNI-1中下载175名AD患者和214名认知正常(cognitively normal,CN)被试的数据,包括600,470个变异和389个结构磁共振成像以及相关临床数据后,首先对数据预处理(遗传变异数据进行(包括质控、坐标转换、定相、填补、质控和注释,并提取出非同义突变)。对结构磁共振成像(包括标准化、不均匀场校正、剥脑等预处理步骤));其次,影像数据提取7个脑网络的皮质表面积和皮层厚度以及提取海马各个亚区体积;然后,采用共稀疏降秩回归模型(Co-Sparse Reduced Rank Regression,CSRRR)来评估非同义突变分别与脑网络和海马亚区之间的关系;最后,通过分子对接,分子动力学模拟,易感基因影像特征的统计分析和Co-IP实验,研究选定的基因与β位点淀粉样前体蛋白裂解酶1(β-site amyloid precursor protein cleaving enzyme 1,BACE1)之间的相互作用,显示这些遗传变异对脑网络和海马亚区的影响。结果(1)脑网络基于表型为脑网络皮层厚度的CSRRR方法,我们发现:ADAMTS5与左右侧视觉网络、左右侧背侧注意网络(dorsal attention network,DAN)、右侧额顶网络(frontoparietal network,FPN)、右侧腹侧注意网络(ventral attention network,VAN)和左侧默认网络(default mode network,DMN)的皮层厚度有关联;TGM4与左右侧视觉网络(visual network)的皮层厚度有关联;RNF212与右侧FPN的皮层厚度有关联;SLC1A4与右侧VAN的皮层厚度有关联;CCDC186与左侧视觉网络的厚度有关联。基于表型为脑网络皮质表面积的CSRRR方法,我们发现:ARMC3与左右侧SMN、左右侧VAN、右侧FPN、左右侧DMN表面积有关联;ANKRD33与左侧SMN表面积有关联,F5与左侧DMN表面积有关联。从分子对接和分子动力学分析的结果,我们可以发现:在脑网络关联基因中,高模糊性驱动的蛋白质-蛋白质对接(High Ambiguity Driven protein-protein Docking,HADDOCK)评分最低为TGM4(-22.1±20.1)。从易感基因影像特征统计检验结果提示:TGM4纯合变异的右侧视觉网络皮层厚度与TGM4杂合变异相比有统计学差异(p<0.05)。Co-IP实验结果显示:下拉复合物中检测到的HA-TGM4带和Flag-BACE1带表明,TGM4与BACE1存在相互作用。(2)海马亚区基于表型为海马亚区体积的CSRRR方法,我们可以发现:MRGPRX3与右侧齿状回颗粒细胞和分子层(granule cell and molecular layer of the dentate gyrus,GC-ML-DG)的体积有关联,NDUFA11与左侧海马角4区(cornu ammonis,CA4)、左侧GC-MLDG、左侧CA3体积有关联;SEPT9与CA4体积有关联;TRPV1与左右侧GC-ML-DG、左右侧CA4、左右侧CA3、右侧海马下托(hippocampal subiculum)、左侧molecular layer体积有关联;USP10与右侧GC-ML-DG体积有关联。从分子对接和分子动力学分析的结果,我们可以发现:BACE1-USP10的HADDOCK评分最低(-63.0±17.5)。从易感基因影像特征统计检验结果提示:USP10纯合变异的右侧海马标准化GC-ML-DG体积与USP10杂合变异相比有统计学差异(p<0.05)。Co-IP实验结果显示:检测到的HA-USP10波段和Flag-BACE1波段在下拉复合体中显示USP10与BACE1存在相互作用。结论TGM4与BACE1交联影响Aβ蓄积,导

关键词： 胶质瘤   MAGE-D4   肿瘤免疫   树突状细胞   CTL  

摘要： 胶质瘤在占成人原发性颅内肿瘤中60%以上,且预后很差。因此,应积极探索新的治疗方法,以提高该病的疗效和预后。近年来,免疫治疗已成为改善胶质瘤患者预后的理想治疗方法。而免疫治疗的关键是找到具有肿瘤特征的靶抗原,使其安全有效。MAGE-D4在正常组织中表达低,在包括胶质瘤在内的各种肿瘤中表达高,可以作为肿瘤免疫治疗靶点。然而,单纯的T细胞免疫治疗往往无效,部分原因可能与抗原表达有关,如肿瘤抗原的异质表达和HLA的低表达。有大量证据表明甲基化和组蛋白乙酰化等表观遗传修饰可以在基因水平上调控基因表达。我们之前的实验也表明去甲基化可以增加脑胶质瘤中MAGE-D4的表达。因此,我们认为表观遗传药物作为胶质瘤免疫治疗的辅助药物是有可能的。因此,本研究将从以下三个部分来阐明MAGE-D4作为免疫抗原对胶质瘤免疫治疗的作用。首先分析胶质瘤中MAGE-D4的表达与临床参数以及免疫相关因素之间的关系;然后预测了MAGE-D4的HLA-A2限制性肽并证实了这些候选肽的亲和力,且制备了高活力的MAGE-D4特异性CTL细胞;最后利用MAGE-D4特异性CTL细胞联合表观遗传药物进行体内外抗胶质瘤研究。我们的研究可能为MAGE-D4肽在胶质瘤免疫治疗中的潜在应用提供理论基础。目的和意义:（1）探讨胶质瘤中MAGE-D4 m RNA与蛋白的表达及与临床参数和患者预后的关系。（2）探索MAGE-D4与胶质瘤免疫的关系,预测并筛选MAGE-D4抗原,来诱导MAGE-D4抗原特异性CTL细胞。（3）分析表观遗传学药物对胶质瘤细胞MAGE-D4和HLA-A2表达的影响,联合表观遗传学药物与MAGE-D4特异性CTL细胞对肿瘤杀伤的效应。以此探究胶质瘤免疫治疗的新方法。方法:（1）利用GEO、Linked Omics和CGGA数据库中的表达数据分析MAGE-D4 m RNA在胶质瘤中的表达情况及与临床参数和患者预后的关系。HPA数据库分析10例胶质瘤中与3例正常脑组织中MAGE-D4蛋白质的表达。采用IHC方法检测MAGE-D4在169例胶质瘤组织中蛋白质的表达情况,分析MAGE-D4蛋白表达与临床病理及预后的关系。（2）利用TIMER和TISIDB在线分析工具分析胶质瘤组织中MAGE-D4 m RNA表达与免疫细胞浸润、免疫细胞分子表达及预后的关系。MAGE-D4 N端截短蛋白的制备与纯化。通过SYFPEITHI、IEDB、EPIJEN、NETMHC和net CTL-1.2软件预测并合成MAGE-D4 N端抗原九肽,MS分析其质量,肽-HLA亲和力和肽稳定性实验验证肽与HLA的亲和力。梯度密度分离法从健康人外周血分离PBMC,CD14+磁珠分离CD14+DC前体细胞并诱导分化为DC,从形态学、流式细胞术（HLA-DR、CD1a、CD80、CD83与CD86表型）和ELISA鉴定DC功能。DC负载MAGE-D4多肽,与磁珠分离出的CD8+T细胞混合培养,制备出MAGE-D4抗原特异性CTL细胞,并通过CCK8、ELISA和ELISPOT法鉴定MAGE-D4抗原特异性CTL细胞的活性。（3）PCR法检测MAGE-D4在胶质瘤中的表达,用q RT-PCR和WB检测表观遗传学药物处理胶质瘤细胞后MAGE-D4 m RNA和蛋白的表达。流式细胞术检测HLA-A2在胶质瘤中的表达,q RT-PCR和流式细胞术检测表观遗传学药物处理胶质瘤细胞后HLA-A2 m RNA与蛋白的表达。LDH释放法测定MAGE-D4特异性CTL细胞对胶质瘤细胞的杀伤并确定最佳效靶比以及对表观遗传学药物处理的肿瘤细胞的体外杀伤作用。阻断实验验证MAG-D4特异性CTL细胞对胶质瘤的杀伤具有HLA限制性。建立荷胶质瘤鼠模型,联合MAGE-D4特异性CTL细胞和表观遗传学药物处理,观察胶质瘤的生长情况。结果:（1）GEO数据库分析显示,胶质瘤中MAGE-D4 m RNA的表达明显高于正常脑组织。Linked Omics数据库中胶质母细胞瘤表达MAGE-D4 m RNA高于其他三种组织类型,MAGE-D4 m RNA高表达患者其生存期较短。CGGA数据显示,原发性胶质瘤中MAGD4m RNA的表达高于复发性胶质瘤,IDH基因突变的样本比其野生型样本表达MAGE-D4 m RNA明显升高,1p/19q联合缺失的胶质瘤比无1p/19q联合缺失样本高表达MAGE-D4 m RNA;MAGE-D4 m RNA高表达患者中位生存期较长。HPA数据库中的MAGE-D4蛋白表达在3例正常脑组织均为阴性,10例胶质瘤标本中8例为MAGE-D4蛋白阳性。胶质瘤组织芯片检测MAGE-D4蛋白的表达,结果显示MAGE-D4蛋白总阳性率为84.7%,其中32例弱阳性,38例中阳性,8例强阳性,MAGE-D4蛋白主要在细胞核,胞胞质