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关键词： 叶酸   表观遗传学   绝经前乳腺癌   肥胖   甲基化   结直肠癌   miRNA   信号通路   生物信息学  

摘要： 叶酸是人体必需的B族维生素,叶酸及其代谢产物在生物体内具有重要的生理生化功能:(1)参与核苷酸的生物合成;(2)在DNA甲基化作用中提供甲基基团的供体和受体。基因组整体甲基化水平及特定癌基因/抑癌基因的甲基化状态异常可促进肿瘤的发生发展,故缺乏叶酸将直接诱发癌症。因此,维持体内充足的叶酸水平并保持正常的叶酸代谢过程对人群防癌抗癌十分有益。已有相当充分的流行病学证据显示,膳食叶酸摄入不足可导致包括乳腺癌、结直肠癌等在内的多种癌症发生风险增加。在乳腺癌中,女性围绝经期前后因雌激素水平的变化而成为乳腺癌异质性的分界点。绝经前乳腺癌和绝经后乳腺癌的基因特征、表观遗传学改变以及病理表现皆有不同,且绝经前乳腺癌比绝经后乳腺癌预后更差、化疗敏感性更低。同时,在乳腺癌的众多风险因素中,肥胖是一个独立的预后因子。超重和肥胖是多种癌症的危险因素,可增加绝经后乳腺癌的发生风险,但却能使绝经前乳腺癌风险降低。造成肥胖与绝经前乳腺癌呈负相关这一“反常”的流行病学现象的分子机制尚不明确。本研究团队前期对美国NHANES数据库的人群资料进行统计分析表明:超重及肥胖人群的红细胞叶酸含量高于正常体重人群。提示叶酸可能在肥胖对绝经前乳腺癌的保护效应中发挥抑癌作用。除乳腺癌外,叶酸与结直肠癌的关系也十分密切。一方面,叶酸在人体内的吸收部位为小肠;另一方面,结直肠黏膜层及上皮组织更新迅速,对人体必需营养物质的异常代谢反应更加敏感。因此,叶酸与消化系统癌症特别是结直肠癌的发生发展紧密相关。流行病学研究显示,结直肠癌患者肠道组织中存在局部性叶酸缺乏。本研究团队已证实小鼠体内缺乏叶酸将异常激活致瘤性Wnt信号通路,导致结直肠部位的肿瘤发生率和多发率显著增加。基于以上两大方面的研究背景,本论文以绝经前女性乳腺组织临床样本和Apc基因敲除小鼠结肠上皮细胞为研究对象,采用经典分子生物学实验与新兴交叉技术生物信息学分析相结合的研究方法,分别在绝经前乳腺癌与结直肠癌中探究了叶酸基于表观遗传学两大机制:甲基化作用和miRNA-mRNA互作途径发挥抗癌效应的分子机制。主要研究内容及结论如下:1.叶酸通过调控表观遗传学中的甲基化作用,在绝经前肥胖女性中发挥抑制乳腺癌发生风险的保护效应。在肥胖状态下,绝经前女性的乳腺组织叶酸状态将随BMI的增加而得到改善和提升,与此同时,基因组总体甲基化水平也同步升高,抑癌基因SFRP1和MLH1的表达也随之显著增加。且MLH1启动子区域的甲基化水平与乳腺叶酸含量呈正相关。提示绝经前女性的乳腺叶酸代谢情况可能受肥胖因素的影响,进而通过基因组总体甲基化和乳腺癌相关基因特异性甲基化作用来抑制乳腺癌的发生。2.叶酸通过调控miRNA-mRNA综合互作网络,参与介导结直肠癌致瘤性信号通路,进而影响结直肠癌的发生发展。Apc基因敲除小鼠叶酸缺乏动物模型显示,叶酸缺乏可导致小鼠结直肠部位的肿瘤发生率和肿瘤多发率显著升高,并影响miRNA的差异表达,进而鉴定出15个DE-miRNA分子。最终构建出可视化的叶酸调控结直肠癌相关Wnt/Apoptosis/Cell cycle信号通路miRNA-mRNA互作网络图。筛选鉴定出各信号通路互作网络中有代表性的miRNA-mRNA负调控作用对:如Wnt信号通路miRNA-mRNA互作网络中的mmu-mi R-27a/Sfrp1及mmu-mi R-361/Ctbp2作用对;Apoptosis互作网络中的mmu-mi R-690/Kras;Cell cycle互作网络中的mmu-mi R-21/Stag2等。至此成功实现了将缺乏一碳维生素的小鼠动物模型结肠上皮DE-miRNA和叶酸灌胃干扰结直肠癌小鼠模型的癌旁组织DEGs进行对接,整合了叶酸代谢相关致瘤信号通路的miRNA与mRNA。由该miRNA-mRNA综合互作网络图可知,叶酸可能通过调控miRNA与靶基因的相互作用从而实现对结直肠癌相关致瘤性信号通路的调节,进而影响恶性肿瘤的演进。综上所述,本论文研究了叶酸通过介导甲基化作用和miRNA-mRNA互作等表观遗传学途径影响乳腺癌和结直肠癌发生发展的分子机制,研究结果为深入明确叶酸的抑癌机制提供了新的理论探索和实验依据。为推动预防医学及公共卫生政策将叶酸纳入常规性癌症化学预防补剂奠定了理论基础。

关键词： 男性   不育   异常的性染色体   细胞遗传学  

摘要： 目的:对男性不育患者性染色体异常进行细胞遗传学研究.方法:选不育男性患者72例,制作G显带染色体核型,并分析其结果.结果:在我院2018—2019年的不育男性患者72例中,经过检验得出不育男性患者性染色体出现异常的核型有8类,其中,不育男性患者性染色体数目异常的占到总人数的43.06％,而且,不育男性染色体结构异常的占到总人数的56.94％.结论:性染色体细胞数目及结构的异常是导致男性出现不育现象的主要原因之一,其为治疗男性不孕之症提供了一定的临床依据.

关键词： 四季金花茶   遗传多样性   遗传结构   保护遗传学  

摘要： 四季金花茶(Camellia perpetua *** et ***)为山茶科(Theaceae)山茶属(Camellia),为桂西南喀斯特地貌,石灰岩特有种。因具有较高的观赏价值和经济价值,近几年被疯狂盗挖,其种群和个体数量急剧减少。本文选取叶绿体DNA(cpDNA)小单拷贝区域(small single Copy,SSC)的一个片段(5191bp),并结合10对微卫星(SSR)引物标记,对四季金花茶12个种群351个个体,遗传多样性和种群遗传结构进行研究,并根据研究结果确定保护单元的划分,提出保护策略。研究结果主要如下:1)基于cpDNA片段序列结果:cpDNA片段(ndhF、rpl32、trnL-UAG和CCSA四个基因及其间隔区)长度为5191bp,共存在37个变异位点,16种单倍型。物种水平上,四季金花茶具有较高水平的遗传多样性(h=0.903,π=0.00069)。种群水平上,3个野生种群和2个移栽种群只有一种单倍型,7个移栽种群含有多种单倍型。单倍型Network网络图成发射状,错配分布图呈现单峰,表面四季金花茶种群存在扩张。单倍型Network网络图中单倍型H1位于网络图中央且频率最高,推测其为祖先单倍型。AMOVA分析表明变异主要发生在种群间(74.31%)。集中分布种群遗传多样性高于地理孤立种群,Mantel检测显示,遗传距离与地理距离显著相关,地理隔离是导致其遗传分化的主要原因。2)基于微卫星(SSR)分子标记结果:结果显示四季金花茶具有较高水平的遗传多样性。物种水平上,平均等位基因数(N)为6.133,平均有效等位基因数(N)为3.386,平均观测杂合度(H)和期望杂合度(H)分别是0.611和0.636。其中外坡屯(WP)种群的遗传多样性最高(N=7.5,H=0.63),企鸟屯(QN)种群的遗传多样性最低(N=4.0,H=0.513),固定指数F在-0.083.181之间。集中分布区种群各项参数均高于地理孤立种群。四季金花茶遗传分化水平较低,遗传分化系数(F)在0.011-0.11之间,基因流较大,各种群间基因流均大于1,遗传变异主要来自种群内(92.13%)。STRUCTURE结果显示,K=6为最佳分组,3个野生种群和一个地理孤立移栽种群各自独立聚成组,其他村民家中移栽种群相互混杂,表明野生种群之间存在一定的遗传分化,移栽种群为来自不同地点的自然种群的集合。3)基于叶绿体全基因组测序:使用Illuminad对端测序法对四季金花茶叶绿体进行全基因组测序。结果显示:四季金花茶叶绿体全基因组全长156.804 bp,具有典型的四方结构,其中反相重复序列区(IRs)长25.996 bp,大单拷贝序列区(LSC)和小单拷贝序列区(SSC)长度分别为86.570、18.242 bp。共注释122个基因,包括编码蛋白基因86个,tRNA基因28个和rRNA基因8个。四季金花茶叶绿体基因组全序列GC含量37.32%。4)提出保护策略:根据四季金花茶的遗传多样性和遗传结构研究结果,对于四季金花茶提出针对性保护策略。就地保护:3个野生种群划分为3个保护单元进行就地保护;迁地保护:村民移栽家中种群,各种群多样性均较高,遗传结构相似,应根据实际情况应选取一个种群迁入种质资源库或移栽回附近自然生境保护其种质资源。

关键词： 呼吸道感染   中西医结合   综述  

摘要： 反复呼吸道感染在婴幼儿时期常见,一般是在一年之内发生呼吸道感染的次数超过正常范围的疾病,得这种疾病的患儿亦称"复感儿",其患儿约占儿科门诊病例的30%,常见于学龄前儿童,是儿童时期的常见病、多发病。引起婴幼儿喘息的原因众多,具体发病机制不明。本文从中西医结合的角度,对近年来相关文献的整理,对复感儿的研究现状进行综述。1 小儿复感表观遗传研究现状小儿复感的发生与机体的表观血象及血清中一些免疫因子关系密切,研究发现,外周血中相关的I

关键词： X连锁腓骨肌萎缩症   家系调查   Sanger测序   GJB1   变异  

摘要： 背景及目的X连锁的Charcot-Marie-Tooth病(CMTX)是一种X连锁的遗传性周围神经病,其主要临床表现是进行性的远端肌肉无力和萎缩、腱反射减弱或消失。1型CMTX(CMTX1)是由缝隙连接β1基因(GJB1)突变引起的。除了神经肌肉表现,少数CMTX1患者还会有一过性中枢神经系统症状,此种症状的发病机制尚不明确。本研究通过一例以“发作性言语不清、四肢无力20小时”症状就诊的先证者入手,对该CMTX1家系进行系谱分析以及基因检测,确定家系致病突变位点,明确遗传学和临床诊断,进而探讨CMTX1的致病机制。方法对一位以“发作性言语不清、四肢无力20小时”表现就诊的CMTX1患者进行详细的病史采集及神经系统体格检查,完善必要的生化、影像学及神经电生理检查,对其家系成员进行病史采集及体检,绘制家系图。采集先证者及家系成员的外周血,提取DNA。应用二代测序技术检测先证者的周围神经病以及肌病相关基因,应用Sanger测序技术对GJB1的外显子1测序。检测出先证者的致病突变位点后,对家系中其他成员相应位点进行测序和家系内的共分离分析。结果先证者是一位28岁男性,以“发作性言语不清、四肢无力20小时”就诊,既往多次出现一过性“中风样”症状,查体发现有远端肌肉无力、萎缩和腱反射消失。患者肢体无力发作时,头部MRI示深部脑白质和双侧胼胝体压部长T1长T2异常信号,水抑制成像序列(FLAIR)及弥散加权成像序列(DWI)呈高信号。神经电生理检查提示四肢周围神经存在脱髓鞘及轴突损害。本次“中风样”症状发作期间存在甲状腺功能亢进。患者家系分析提示此疾病为X连锁显性遗传,家族中女性患者症状轻于男性,临床表现为周围神经病,但只有先证者出现“中风样”中枢神经系统功能障碍。通过对先证者的DNA进行周围神经病及肌肉相关基因的二代测序以及GJB1外显子1的Sanger测序,在神经特异性启动子区域,即P2区,发现了新的突变位点c.-170T>G。该突变在家系中与疾病共分离,且在100个正常对照的DNA样品中未见该突变,可以明确是该家系的遗传学病因。结论位于GJB1非编码区的新致病突变c.-170T>G是该家系的遗传学病因,这是首次发现的与一过性中枢神经系统症状相关的非编码区突变。先证者的一过性甲状腺功能障碍可能与本次“中风样”症状发生有关。GJB1该位点的突变可能会使其编码的缝隙连接蛋白(Cx32)的表达减少,导致疾病的发生。

关键词： Waardenburg综合征   SOX10基因   遗传性耳聋   基因突变   内耳畸形  

摘要： [目的]Waardenburg(WS)综合征是一种先天性常染色体显性遗传疾病,临床上通常以单侧或双侧感音神经性听力损失,皮肤、毛发及虹膜色素缺失或分布异常为主要表现,并可依据其表型将其分为4型。由于WS是目前最常见的综合征型听力疾病,具有高度的遗传异质性,经证已发现PAX3、MITF、SNAI2、EDN3、EDNRB、SOX10六个基因的突变与WS的发病有关。本研究通过对一个WS耳聋家系进行研究,初步探索该耳聋家系的相关突变基因,分析该家系听力学及遗传学特征,为该耳聋家系提供一定的遗传及婚育指导。[方法]本研究的一名先证者(男孩,16岁),来自于云南省建水县,通过对其表型进行研究,我们发现该先证者的表型符合WS2。我们以该患者为中心进行家系信息调查,追踪到了一个具有16名成员的WS家系,该家系中共有2名WS耳聋患者。随后,采集所有家系成员的基本信息,向2名符合WS表型的家系成员询问更加详细的发病史,如发病时间、耳毒性药物使用史、WS相关表型、耳聋进展史、家族史以及是否有人工耳蜗手术史等,并对这两名患者进行全身体格检查、听力学检查(纯音测听、声导抗、听性脑干反应)及影像检查(颞骨CT及内耳MRI),并使用WPS2019绘制家系图谱。在征得其家系成员同意后,收集该家系中3名成员(包括2名WS耳聋患者在内)即先证者及其父母的外周静脉血3-5ml。使用QIAamp DNA提取试剂盒提取3名成员外周血DNA后,送至广州金域医学检验所进行基因测序,将提纯后的DNA接上相关引物经PCR扩增,最后将扩增纯化后的最终文库放到TruSight One测序版上经NextSeq500测序仪对 WS 相关基因(PAX3、MITF、SNAI2、EDN3、EDNRB、SOX10)的外显子区进行测序,测序结果与人类基因突变数据库、dbSNP、1000人基因组计划、ClinVar、ESP6500数据库进行比对,通过计算机软件(ANNOVAR)分析其治病突变位点。随后对先证者及其父母的突变位点行PCR扩增和Sanger测序验证,[结果](1)该家系中有两名WS患者,分别为先证者(Ⅲ-4)及其母亲(Ⅱ-4),两者都患有双耳极重度感音神经性耳聋,都具有右侧虹膜色素减退的表现,且W值<1.95(内眦无外移),根据其表型两名患者被诊断为Ⅱ型Waardenburg综合征(WS2);先证者的颞骨CT及内耳MRI提示其双侧半规管畸形。(2)基因测序结果显示该家系中的两名WS2患者均携带SOX10基因(NM06941.3)第2号外显子c.255G>A杂合无义突变,软件预测该突变可能会导致该基因所编码蛋白质的第85号氨基酸翻译为终止密码子,使得蛋白质翻译提前终止;先证者的父亲未检测到相关耳聋基因突变。[结论](1)该家系中的两名WS2患者均携带SOX10(c.255G>A)杂合无义突变,检索人类基因突变数据库、dbSNP、1000人基因组计划、ClinVar、ESP6500数据库均未见该突变被收录,综合考虑该变异为此家系种的致病突变;(2)根据WS常染色体显性遗传特点及孟德尔遗传规律,我们推测SOX10(c.255G>A)突变在此家系中的遗传方式为常染色体显性遗传,且先证者(Ⅲ-4)有很大可能将致病基因遗传给下一代。(3)基因测序技术广泛用于云南省WS患者的分子遗传诊断具有一定的应用价值和前景。

关键词： 乳头状甲状腺微癌   淋巴结转移   体细胞突变   细胞粘附   手术策略  

摘要： 目的:本研究旨在解析乳头状甲状腺微癌(papillary thyroid microcarcinoma,PTMC)侵袭性的遗传学特征与危险因素,并初步探讨PTMC并侧区淋巴结转移的相关手术策略。方法:1.16例PTMC根据是否伴有腺外侵犯和淋巴结转移分为侵袭组与非侵袭组,并行全外显子测序。GO/KEGG分析与侵袭性相关的基因突变及其生物学功能,另外70例样本的验证队列行靶向测序,验证筛选出的基因突变。2.回顾近10年的PTMC的临床病理资料,最终纳入3686例。利用χ2检验与多因素Logistic回归分析淋巴结转移的危险因素。3.回顾近9年的PTMC的临床病理资料,最终纳入129例伴同侧侧区淋巴结转移而无临床腺外侵犯的单侧PTMC病例。根据初次手术范围分为单侧腺叶切除组(Group I)和甲状腺全部切除组(Group II),比较两组间的手术结局和无复发生存率。结果:1.16例PTMC中共有234个基因的254个体细胞突变,其中侵袭组有168个基因中的178个突变,而非侵袭组有74个基因中的76个突变。侵袭组的突变负荷明显高于非侵袭组(P=0.004)。GO/KEGG通路富集分析发现参与细胞粘附相关的 1 个基因(MUC5B、TNN、SSPO、PPFIA1、PCDHGA2、ITGA8、ITGA4、DCHS1、CRNN、ROCKM1、RELN、LAC2和AEBP1)的非同义突变在侵袭组中富集,70例验证队列靶向测序的结果也已证实(P=0.000004)。2.多因素分析显示:男性、年龄<55岁、肿瘤最大直径>6.5mm、脉管侵犯、多灶性、腺外侵犯和侧区淋巴结转移是PTMC中央区淋巴结转移的独立危险因素;男性、肿瘤最大直径>6.5mm、桥本氏甲状腺炎、脉管侵犯、腺外侵犯和中央区淋巴结转移是PTMC侧区淋巴结转移的独立危险因素。*** Ⅰ纳入62例,Group Ⅱ纳入67例。与Group Ⅰ相比,Group Ⅱ的手术时间更长(150分钟vs 120分钟,P<0.001);术后甲状旁腺功能减退的发生率更高(P<0.001)。60个月的中位随访期内,两组间的无复发生存率无统计学差异(P=0.6005)。结论:PTMC侵袭性的遗传学基础是具有细胞粘附相关的多基因突变;多因素分析显示:男性、年龄<55岁、肿瘤最大直径>6.5mm、腺外侵犯和淋巴结转移等是其独立危险因素;临床治疗应根据危险因素行个体化策略,尤其对伴有同侧侧区淋巴结转移而无临床腺外侵犯的单侧PTMC可采取腺叶切除加颈淋巴结清扫。

关键词： 隐种   水鳖科   物种界定   系统发育   居群遗传学  

摘要： 物种是生物多样性的基本功能单元,物种的划分对生物多样性的评估和保护至关重要。虽然到现在还没有统一的物种概念,但一般来说,物种被界定为在形态、遗传或生态位上具有显著分化的谱系。先前大多数物种是基于形态特征来鉴定的,然而,许多形态相似但遗传背景不同的物种(隐种)就会很难被鉴定出来,这对生物多样性的评估有一定的影响。这种隐性物种的存在既与生物的内在属性有关,又与外部环境条件有关,对这些隐藏物种的鉴定很可能会揭示出新的物种地理分布模式,甚至可以改变我们对生物多样性当前地理分布模式上的认识。近年来,随着分子生物学技术在物种划分中的发展与应用,这种隐藏的生物多样性越来越多地被揭示出来。为了更好地保护和揭示植物的宏观进化和生态作用,开展植物的隐种多样性研究是非常必要的。海菜花属植物是水生植物的典型代表之一,其形态变异很大,可能存在的隐种多样性给传统分类学带来了极大的困难。海菜花属植物在全球有两个分布中心,一是亚洲,另外一个是非洲。先前对亚洲分布的海菜花属植物的研究表明该区域存在隐藏的海菜花物种,但对非洲海菜花属植物开展的分子系统学研究非常少,我们对非洲分布的海菜花属植物的多样性的认识仍十分有限。本研究考察了非洲赞比亚和喀麦隆两个国家分布的非洲热带特有海菜花属植物Otte lia ulvifolia多个自然居群并进行了取样,利用6个叶绿体DNA片段和核ITS区序列以及6个微卫星多态性标记对***的代表居群进行了分子系统发育关系和群体遗传结构研究。通过系统发育推断、物种界定分析以及遗传结构分析,我们发现***居群至少存在三个组,每个组代表独特的花类型:两性黄花、单性黄花和两性白花类型;虽然目前在群体内观察到了大量的遗传变异(>50%),但过度的人为活动在不久的将来很可能导致居群遗传多样性的丧失。依据本研究所开展的分子系统学及居群遗传学分析的结果,我们认为***复合体至少存在三个隐种,本研究对非洲分布的海菜花属植物的分类提供了基础资料,同时也为该区域海菜花属植物的保护提供了依据。

ISBN: (数字)9781526138187 ISBN: (纸本)9781526138170

摘要： Is deafness a disability to be prevented or the uniting trait of a cultural community to be preserved? Combining the history of eugenics and genetics with deaf ...

关键词： 地中海贫血   分子诊断   SNPscanTM   CNVplexTM   临床验证   Hb Agrinio   HbH病  

摘要： 研究背景与目的地中海贫血(thalassemia简称地贫)是一组由于α/β珠蛋白基因簇缺失或者突变导致造血障碍从而引起小细胞低色素性的溶血性贫血。地中海贫血通常为常染色体隐性遗传病,男女双方均携带了同型珠蛋白(同为α或者同为β)基因的点突变或者缺失突变,则该夫妇对为高风险夫妇对,有可能生出Hb Bart’s水肿胎、Hb H病以及中间型或重型β地中海贫血患儿。目前地中海贫血的治疗是规律输血配合铁螯合剂进行去铁治疗,对家庭、对社会来说都是沉重的经济负担以及巨大的精神压力。针对地中海贫血而言,预防的重要性胜于治疗。开展人群普查以及遗传咨询,全面普及婚前以及产前检查,以预防Hb Bart’s水肿胎的发生以及中间型或重型β地中海贫血患儿的出生,是我国公共卫生的重要组成部分。根据最新的 HbVar 数据(http://***/cgi-bin/hbvar),全世界已经发现超过500种与地贫相关的突变类型。其中中国人群中最常见的α缺失有(--SEA/),此外还有(-α3.7/)、(-α4.2/)、(--THAI/)、(--FIL/)、(--11.1kb/)和(-α27.6kb/)等,最常见的α点突变有αQSα/、αCSα/、αWSα/,此外还有αCD31α和αCD78α/等。中国人群中已报道过的β地中海贫血点突变至少有54种,其中以下这八种突变大约占全部突变类型93%以上:HBB:c.12629delCTTT,HBB:c.52A>T,HBB:c.316-197C>T,HBB:c.-78A>G,HBB:c.21617insA,HBB:c.79G>A,HBB:c.92+1G>T和HBB:c.-79A>G,此外还有HBB:c.-123A>T、HBB:c.-140C>T和HBB:c.162delT等;中国人群中已报道过的缺失型β-地中海贫血有5种突变类型,包括Chinese缺失、东南亚型HPFH缺失、Taiwanese缺失、Gantonese 缺失和 Yunnanese 缺失。地中海贫血点突变的基因检测方法目前主要是PCR-RDB、Sanger测序、荧光PCR熔炼曲线法、HPLC、HRM和ARMS-PCR等,缺失型地中海贫血的突变检测方法主要有Southern blot、Gap-PCR、MLPA、荧光定量PCR和array-CGH等。它们或操作繁琐,或检测通量低,虽可以应用于常规临床检测,但不适用于大人群的基因筛查。近年热门的二代测序以其高准确性、高灵敏性以及高通量可以应用于大人群的基因筛查,但是费用昂贵,难以大范围推广应用。建立简单快捷、准确可靠、经济实用的高通量检测技术,既满足地中海贫血大规模人群筛查的公共卫生需要,也是目前地贫基因诊断技术创新的新挑战。本研究的目标即建立一种基于同一检测平台的地贫分子诊断新途径与新方法,准确可靠、简单实用、高通量、低成本,适合当前地贫大规模人群筛查和常规分子诊断。研究方法与内容根据地贫的发病机制及分子基础,针对中国人群中已报道(截止本研究启动时)的α/β地贫点突变以及缺失突变,本研究具体实施了以下研究方案。***的地中海贫血点突变检测技术--利用连接酶的高特异性识别SNP位点的等位基因,在连接探针末端加入长度不同的非特异性序列,然后通过连接酶的连接反应获得不同位点所对应的不同长度的连接产物,接着利用带有荧光标记的通用引物把连接产物作为模板再进行PCR反应,把连接产物扩增出出来,接下来进行毛细管电泳,使不同荧光标记的不同序列分离出来,最后对电泳图谱进行分析以达到对不同SNP位点的基因型分型的目的。***的地中海贫血缺失突变检测技术--利用连接酶的高特异性连接反应使目的片段通过杂交、连接,从而在连接探针末端引入长度不同的非特异性序列以及利用连接酶的特异性连接反应获得不同位点所对应的长度各异的连接产物,再通过带有不同标记荧光的通用引物通过PCR反应将连接产物进行扩增,然后把PCR产物上测序仪跑毛细管电泳从而把不同长度的片段分离出来,最后对毛细管电泳图谱进行分析读取各个位点的峰值,通过计算各个目标区峰相对参照峰的比值,算出待检区域的拷贝数。3.诊断方法初步评价。为当前地贫大规模人群筛查提供简单实用的分子诊断方法,是本研究的目标之一,为初步评价新诊断方法用于地贫人群筛查的实用性与可行性,本研究抽取100份婚前/产前检查标本,应用新诊断方法及gap-PCR、Sanger测序同时进行检测,对检测结果进行比较。4.诊断方法的大样本盲法分析评价。准备了 1747份表型资料齐全、已采用gap-PCR、RDB、Sanger测序等方法进行地贫分子诊断的待检样本,将这些样本进行盲法编号后,应用新诊断方法进行检测分析;然后对比分析相对应的基因检测结果,对于结果不相符的标本,再用gap-PC